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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】+ 提取的蛋白含量太低
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Jiaoning

铜虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】+ 提取的蛋白含量太低

六孔板细胞长得80%汇合时我换加了药的无血清培养基后，加药2h后又加了一个刺激剂，24后然后提蛋白，用的是碧云天RIPA裂解液(强)，加了PMSF的，用细胞刮收集的细胞，后来用BCA试剂盒定量蛋白浓度时，发现蛋白浓度很低，大概在0.4mg/ml。而且师兄们也都用该裂解液，提取的蛋白没问题的。做了好多次都是这样，不知道是什么原因，请教各位大侠，拜托了。
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学以致用
1楼 2011-09-19 09:31:29
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walkinghand

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

为撒加无血清的培养液啊，80%汇合的细胞密度应该很高的呀，如果按试剂盒操方法走该不会有错的啊。
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2楼2011-09-20 15:43:39
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Jiaoning

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by walkinghand at 2011-09-20 15:43:39:
为撒加无血清的培养液啊，80%汇合的细胞密度应该很高的呀，如果按试剂盒操方法走该不会有错的啊。

因为要加药和刺激剂，所以要避免血清的干扰。会不会因为细胞状态不好蛋白量就低了呢？
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学以致用
3楼2011-09-23 09:01:36
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walkinghand

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-09-23 10:57:21
如果正常培养时都加5-10%的胎牛血清的话，那后面实验都要加上，血清就如同细胞吃的饭，没了生长状态会有影响，药和刺激物都会影响细胞生长，不过我做过24h有无血清的对比实验，是SK-N-SH细胞，差异不大，你在看看还有别的疏忽不？
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4楼2011-09-23 10:29:03
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sml19900607

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
主要还是看你的细胞，即使如果没有血清，如果细胞多，提出的蛋白应该也不会少，可能操作上有些没有注意的
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累啊
5楼2012-03-14 20:50:21
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你是不是加裂解液太多了把它稀释了啊~~~

你一个孔加多少裂解液啊？
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6楼2012-12-02 23:02:40
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