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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌质粒提取浓度太低求助
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌质粒提取浓度太低求助 已有8人参与

我质粒提取已经好几次啦，每次提取出来浓度都是很低，我这是低拷贝质粒，想提取出质粒做转化实验，求大侠指导一下并帮我分析一下为什么我提取的质粒跑电泳结果显示浓度太低？
     我曾经加大过菌量可是结果却提不出来，我的操作步骤都是严格按照天根小量中提试剂盒的说明书上来的，求高人指导下奥。
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1楼 2013-12-23 15:01:39
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:38:43
低拷贝的质粒确实 不是很好提取，所以菌液量一般是加倍的。但是菌液加倍后，相应地溶液I、II、III也应该加倍。也可以是分成两管菌来裂解，离心后上清加入到同一个纯化柱。
其实你的目的只是质粒转化，质粒转化的效率比连接产物要高，哪怕是浓度很低条带很亮，也可以先试着转化的，没必要在提取这个问题纠缠这么久
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你的日子如何，你的力量也必如何！
8楼2013-12-24 09:24:07
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 13:56:15
就是只要我提取出来了，不用管浓度高低都可以进行转化实验啦？...

是的，只要有质粒，所以可以试试加1,5,10ul的质粒来分别转化，挑菌看看是否阳性。一般来说质粒转化几乎都是阳性
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你的日子如何，你的力量也必如何！
15楼2013-12-24 14:24:00
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