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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌质粒提取浓度太低求助
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌质粒提取浓度太低求助 已有8人参与

我质粒提取已经好几次啦，每次提取出来浓度都是很低，我这是低拷贝质粒，想提取出质粒做转化实验，求大侠指导一下并帮我分析一下为什么我提取的质粒跑电泳结果显示浓度太低？
     我曾经加大过菌量可是结果却提不出来，我的操作步骤都是严格按照天根小量中提试剂盒的说明书上来的，求高人指导下奥。
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1楼 2013-12-23 15:01:39
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:39:28
有几个情况：
第一是你放置的菌液时间太长，质粒已经消失
第二是你最后加水溶解时加的太多，导致浓度较低
第三是你的质粒拷贝数低，有可能使菌的活化程度不够，可适当多培养几次，再提取质粒
这是我做实验的几点心得，望对你有用
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10楼2013-12-24 09:28:33
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zhl875891551

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:42
天根的效率还不错啊，你试试加大菌液，最后少加些水溶解。。
赞一下 回复此楼
心有多大，舞台就有多大！
2楼2013-12-23 16:23:12
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天猫天猫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:49
1、采用加富的培养基摇菌，如用超级肉汤培养基或直接将LB培养基中的酵母粉和蛋白胨加倍，仔细调节培养基的初始pH值至中性或微微偏碱性；
2、培养基中添加170ug/ml氯霉素适当抑制菌体的增殖，促进质粒复制；
3、注意培养过程中的通气状态。
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3楼2013-12-23 16:39:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:53
多收些菌。裂解时适当增加各溶液的体积，用同一个柱子binding（多上几次）。祝好运
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4楼2013-12-24 02:18:27
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