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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌质粒提取浓度太低求助
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌质粒提取浓度太低求助 已有8人参与

我质粒提取已经好几次啦，每次提取出来浓度都是很低，我这是低拷贝质粒，想提取出质粒做转化实验，求大侠指导一下并帮我分析一下为什么我提取的质粒跑电泳结果显示浓度太低？
     我曾经加大过菌量可是结果却提不出来，我的操作步骤都是严格按照天根小量中提试剂盒的说明书上来的，求高人指导下奥。
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1楼 2013-12-23 15:01:39
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为你用了试剂盒

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
6楼2013-12-24 03:40:24
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧
引用回帖:
12楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 13:54:55
是的，我用天根的，您是怎么做的呢？非常好奇...

见15楼，自己配配溶液I，II，III提取就行了。
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找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
17楼2013-12-25 01:52:04
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧
★ ★
gyesang: 金币+2, 有道理！ 2014-03-28 16:40:57
真正专业做分子生物学的实验室是不喜欢用试剂盒提取DNA的，一般喜欢用试剂盒的都是一些以分子生物学为辅助的实验室，因为简单省事，比如做化学的想做点生物啥的。
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找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
18楼2013-12-25 01:57:36
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:41:33
gyesang: 回帖置顶 2014-03-28 16:41:35
引用回帖:
20楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-25 09:39:53
能否把溶液I，II，III和最后的洗脱液如何配置，以及实验操作步骤告知呢？静待回复，感谢。...

就是最普遍的碱法提取
溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0），加RNase。
配制方法：1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。在121℃高压灭菌15min ，贮存于4℃。
溶液Ⅱ：0.2M NaOH，1% SDS。
配制方法：2M NaOH 1ml，10%SDS 1ml，加ddH2O至10ml。
溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。
配制方法：5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddH2O至500ml。4℃保存备用。
苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）
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找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
22楼2013-12-25 10:53:32
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