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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

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专业: 临床微生物学检验

[求助] 细菌质粒提取浓度太低求助已有8人参与

我质粒提取已经好几次啦，每次提取出来浓度都是很低，我这是低拷贝质粒，想提取出质粒做转化实验，求大侠指导一下并帮我分析一下为什么我提取的质粒跑电泳结果显示浓度太低？
我曾经加大过菌量可是结果却提不出来，我的操作步骤都是严格按照天根小量中提试剂盒的说明书上来的，求高人指导下奥。

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1楼 2013-12-23 15:01:39

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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧

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专业: 病原细菌与放线菌生物学

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:41:33
gyesang: 回帖置顶 2014-03-28 16:41:35

引用回帖:

20楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-25 09:39:53
能否把溶液I，II，III和最后的洗脱液如何配置，以及实验操作步骤告知呢？静待回复，感谢。...

就是最普遍的碱法提取
溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0），加RNase。
配制方法：1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。在121℃高压灭菌15min ，贮存于4℃。
溶液Ⅱ：0.2M NaOH，1% SDS。
配制方法：2M NaOH 1ml，10%SDS 1ml，加ddH2O至10ml。
溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。
配制方法：5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddH2O至500ml。4℃保存备用。
苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）