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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳没带 已有4人参与

最近做蛋白电泳,做了三次都没带,大家给分析分析。我是想自己纯化一下实验室买的粗酶粉。
      1、取粗酶粉充分溶解后,10000rpm离心20分钟,弃下层沉淀。
      2、取上清液加硫酸铵盐析,取一定体积缓冲液将下层沉淀蛋白溶解
      3、脱盐柱脱盐处理。
     4、测蛋白浓度4.5mg/ml
然后取20ul 加5ul上扬缓冲液,煮沸5分钟。跑sds-page,marker跑的很好,可是蛋白条带没有。自己做了两次,让别人带了一次都没有条带。请大家给分析分析问题出现在哪了
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成长这件xiao事。。。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

得确定粗酶粉溶解之后离心得到的上清液和你跑的样品里都有酶活力,都有条带。
有些色素跑电泳跑不出来,但是用BCA法却能测得到。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2014-01-30 21:33:05
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tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangmiao1112: 金币+2 2013-12-23 12:15:01
分析量在marker范围内吗?是不是已经跑过了?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-12-22 21:22:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangmiao1112: 金币+2 2013-12-23 12:19:14
蛋白浓度测得正确吗?用什么方法测的?有些缓冲液里的成分可能干扰蛋白定量。
3楼2013-12-23 06:48:57
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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tinytan at 2013-12-22 21:22:14
分析量在marker范围内吗?是不是已经跑过了?

是用的2709碱性蛋白酶,分子量在27kda左右。没有跑过
成长这件xiao事。。。
4楼2013-12-23 12:15:57
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