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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳没带
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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳没带 已有4人参与

最近做蛋白电泳，做了三次都没带，大家给分析分析。我是想自己纯化一下实验室买的粗酶粉。
      1、取粗酶粉充分溶解后，10000rpm离心20分钟，弃下层沉淀。
      2、取上清液加硫酸铵盐析，取一定体积缓冲液将下层沉淀蛋白溶解
      3、脱盐柱脱盐处理。
     4、测蛋白浓度4.5mg/ml
然后取20ul 加5ul上扬缓冲液，煮沸5分钟。跑sds-page，marker跑的很好，可是蛋白条带没有。自己做了两次，让别人带了一次都没有条带。请大家给分析分析问题出现在哪了
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成长这件xiao事。。。
1楼 2013-12-22 21:18:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangmiao1112: 金币+2 2013-12-23 12:19:14
蛋白浓度测得正确吗？用什么方法测的？有些缓冲液里的成分可能干扰蛋白定量。
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3楼2013-12-23 06:48:57
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tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangmiao1112: 金币+2 2013-12-23 12:15:01
分析量在marker范围内吗？是不是已经跑过了？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2013-12-22 21:22:14
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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tinytan at 2013-12-22 21:22:14
分析量在marker范围内吗？是不是已经跑过了？

是用的2709碱性蛋白酶，分子量在27kda左右。没有跑过
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成长这件xiao事。。。
4楼2013-12-23 12:15:57
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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-23 06:48:57
蛋白浓度测得正确吗？用什么方法测的？有些缓冲液里的成分可能干扰蛋白定量。

蛋白浓度用的是考马斯亮蓝测的。今天用了bca又测了一次，结果蛋白含量还是很大的。想问一下是不是酶粉的问题？
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成长这件xiao事。。。
5楼2013-12-23 12:19:08
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