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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳没带 已有4人参与

最近做蛋白电泳,做了三次都没带,大家给分析分析。我是想自己纯化一下实验室买的粗酶粉。
      1、取粗酶粉充分溶解后,10000rpm离心20分钟,弃下层沉淀。
      2、取上清液加硫酸铵盐析,取一定体积缓冲液将下层沉淀蛋白溶解
      3、脱盐柱脱盐处理。
     4、测蛋白浓度4.5mg/ml
然后取20ul 加5ul上扬缓冲液,煮沸5分钟。跑sds-page,marker跑的很好,可是蛋白条带没有。自己做了两次,让别人带了一次都没有条带。请大家给分析分析问题出现在哪了
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成长这件xiao事。。。
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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-23 06:48:57
蛋白浓度测得正确吗?用什么方法测的?有些缓冲液里的成分可能干扰蛋白定量。

蛋白浓度用的是考马斯亮蓝测的。今天用了bca又测了一次,结果蛋白含量还是很大的。想问一下是不是酶粉的问题?
成长这件xiao事。。。
5楼2013-12-23 12:19:08
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tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangmiao1112: 金币+2 2013-12-23 12:15:01
分析量在marker范围内吗?是不是已经跑过了?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-12-22 21:22:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangmiao1112: 金币+2 2013-12-23 12:19:14
蛋白浓度测得正确吗?用什么方法测的?有些缓冲液里的成分可能干扰蛋白定量。
3楼2013-12-23 06:48:57
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wangmiao1112

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tinytan at 2013-12-22 21:22:14
分析量在marker范围内吗?是不是已经跑过了?

是用的2709碱性蛋白酶,分子量在27kda左右。没有跑过
成长这件xiao事。。。
4楼2013-12-23 12:15:57
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