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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 绿色荧光蛋白SDS-PAGE电泳条带分析
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荞麦tao

新虫 (小有名气)

[求助] 绿色荧光蛋白SDS-PAGE电泳条带分析 已有1人参与

能不能帮我分析下SDS-PAGE电泳图谱，用的百分之十二分离胶，百分之五浓缩胶。中间那条是Marker,两边是样品蛋白，谢谢了
绿色荧光蛋白SDS-PAGE电泳条带分析
P31205-205908.jpg
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1楼 2013-12-06 15:27:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-12-07 09:19:09
不要把胶放干了才拿来照相。你要分析什么？样品是什么？是否有对照？期望看到什么？
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2楼2013-12-07 04:55:11
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荞麦tao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-07 04:55:11
不要把胶放干了才拿来照相。你要分析什么？样品是什么？是否有对照？期望看到什么？

左边可以看到的两个泳道是沉淀跑出的条带，第三个泳道是marker左边是上清液跑出的条带，我的目的蛋白是绿色荧光蛋白，大约在31.9kDa处。沉淀中可以清楚的看出目的蛋白的条带，但是上清液中却几乎看不到，能说明目的蛋白大多集中在沉淀中吗？还是说沉淀中哪只是包涵体？
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3楼2013-12-08 20:55:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
荞麦tao: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2013-12-11 14:49:51
沉淀里包括包涵体和未破碎的菌体，在上样buffer的作用下，细菌会被裂解。如果完全是包涵体，杂带会很少。我看你的上清里面蛋白不多而沉淀里带比较多，说明破碎效果不好。需要调整一下破碎条件。你是做的超声破碎？
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4楼2013-12-09 03:08:53
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荞麦tao

新虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-12-12 09:59:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-09 03:08:53
沉淀里包括包涵体和未破碎的菌体，在上样buffer的作用下，细菌会被裂解。如果完全是包涵体，杂带会很少。我看你的上清里面蛋白不多而沉淀里带比较多，说明破碎效果不好。需要调整一下破碎条件。你是做的超声破碎？

我是用超声波破碎的，5min。谢谢你的回复了
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5楼2013-12-11 14:48:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 荞麦tao at 2013-12-11 14:48:54
我是用超声波破碎的，5min。谢谢你的回复了...

做超声破碎时做对照（未诱导），菌体破碎后会从浑浊变成半透明。
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6楼2013-12-12 02:13:49
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