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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳没有条带
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一切只是尘埃

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳没有条带

我的蛋白预测的等电点是在8-8.5，单体分子量为20-27kd，形成三聚体后有活性，我现在想跑非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳看看是不是形成三聚体，但是我按照碱性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法及酸性蛋白非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法都跑了电泳，两种方法都没有我的条带，谁知道这会是什么原因？！
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1楼 2013-06-06 13:02:04
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你之前跑过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳吗？有没你的目的条带？
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2楼2013-06-09 11:28:56
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一切只是尘埃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qianshengguo at 2013-06-09 11:28:56
你之前跑过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳吗？有没你的目的条带？

变性胶是有我的条带的呀，跑非变性胶之前跑过，非变性胶之后也跑过，都有
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3楼2013-06-10 08:33:55
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1 2013-06-10 13:24:35
这个我感觉你需要摸索一下你的分离胶的浓度，非变性胶其实不能看出什么大小的，其在胶上的迁移率受到很多因素，除了分子量还受到结构，pI等等,所以现在很少人做什么非变性电泳看蛋白性质。所以你如果想确定是否是多聚物，最简单的方法我认为是走个凝胶柱，从出峰来看。
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4楼2013-06-10 10:41:39
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一切只是尘埃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-06-10 10:41:39
这个我感觉你需要摸索一下你的分离胶的浓度，非变性胶其实不能看出什么大小的，其在胶上的迁移率受到很多因素，除了分子量还受到结构，pI等等,所以现在很少人做什么非变性电泳看蛋白性质。所以你如果想确定是否是多 ...

分离胶的浓度用的8%的！会不会是因为形成的多聚体太大进不去胶？！
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5楼2013-06-13 08:58:42
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wufeifei2417

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

非变性胶影响因素很多，可以试试：
不灌浓缩胶，因为有蛋白可能在浓缩胶中可能发生聚集
上样前先离心几分钟，去除沉淀
还可以在样品中加少量非离子型去垢剂，增溶  

总之，保证样品的溶解性能、稳定性能、生物活性
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6楼2013-06-13 21:20:28
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一切只是尘埃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wufeifei2417 at 2013-06-13 21:20:28
非变性胶影响因素很多，可以试试：
不灌浓缩胶，因为有蛋白可能在浓缩胶中可能发生聚集
上样前先离心几分钟，去除沉淀
还可以在样品中加少量非离子型去垢剂，增溶  

总之，保证样品的溶解性能、稳定性能、生物 ...

加了去垢剂以后还能保持原来的构型吗？！我是要看样品是否形成三聚体
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7楼2013-06-14 08:40:18
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1063301740

铁虫 (正式写手)
您好，我也遇到了同样的问题，我的蛋白只在浓缩胶加样出，根本不往下跑，每次无法在分离胶上看到带，不知道怎么办，蛋白质真的很难做。
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知我者谓我心忧，不知我者为我何求
8楼2018-04-23 16:44:23
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