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pink3sky

木虫 (小有名气)

[求助] 引物设计求教移码问题 请帮帮忙 谢谢

之前引物设计没有加起始子和终止子,看到很多人沟通交流的帖子,自己重新设计了自己的引物,请大神帮忙看看有没有什么没有注意到的地方!谢谢
      准备设计蛋白全基因序列的其中一部分序列构建原核表达载体,选择的载体是pGEX-6p-1,想插入的酶切位点是BamH1和Xho1,设计的引物是正向引物:5’-CG GGATCCGA GGGTATTGAAAGTGCCGAGAT-3’;反向引物:5’-CAG CTCGAGTGA CG CAGTGACTGCTGCTATGTG-3’,插入的序列预计是400个碱基(另外一对设计的引物插入序列是780个碱基)。
请大神帮我看看下面图片中设计的引物是否正确!还有就是需要保证序列在阅读框内需要如何保证 我是在上下游引物中酶切位点多加了两个碱基,不知道这样是否可行,O(∩_∩)O谢谢
引物设计求教移码问题 请帮帮忙 谢谢
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引物设计求教移码问题 请帮帮忙 谢谢-1
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引物设计求教移码问题 请帮帮忙 谢谢-2
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zwp9308

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wp870727290 at 2015-01-09 21:27:07
我也在做同样的酶切构建表达载体,虽说表达载体构建成功了,但是诱导表达的时候只有GST标签表达,没有目标蛋白的表达,不知道楼主这个实验做得怎么样?有没有出现我类似的情况呢?可否指教指教?

请问楼主问题解决了吗?我也遇到同样的问题

发自小木虫Android客户端
4楼2021-09-06 22:00:59
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wp870727290

新虫 (小有名气)

我也在做同样的酶切构建表达载体,虽说表达载体构建成功了,但是诱导表达的时候只有GST标签表达,没有目标蛋白的表达,不知道楼主这个实验做得怎么样?有没有出现我类似的情况呢?可否指教指教?
2楼2015-01-09 21:27:07
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pink3sky

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wp870727290 at 2015-01-09 21:27:07
我也在做同样的酶切构建表达载体,虽说表达载体构建成功了,但是诱导表达的时候只有GST标签表达,没有目标蛋白的表达,不知道楼主这个实验做得怎么样?有没有出现我类似的情况呢?可否指教指教?

我的目的蛋白表达出来了,使用的是过柱纯化,也验证过了。你具体是什么问题?
3楼2015-01-10 18:38:11
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