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pink3sky

木虫 (小有名气)

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[求助] 引物设计求教移码问题请帮帮忙谢谢

之前引物设计没有加起始子和终止子，看到很多人沟通交流的帖子，自己重新设计了自己的引物，请大神帮忙看看有没有什么没有注意到的地方！谢谢
准备设计蛋白全基因序列的其中一部分序列构建原核表达载体，选择的载体是pGEX-6p-1，想插入的酶切位点是BamH1和Xho1，设计的引物是正向引物：5’-CG GGATCCGA GGGTATTGAAAGTGCCGAGAT-3’；反向引物：5’-CAG CTCGAGTGA CG CAGTGACTGCTGCTATGTG-3’，插入的序列预计是400个碱基（另外一对设计的引物插入序列是780个碱基）。
请大神帮我看看下面图片中设计的引物是否正确！还有就是需要保证序列在阅读框内需要如何保证我是在上下游引物中酶切位点多加了两个碱基，不知道这样是否可行，O(∩_∩)O谢谢

2.jpg

1.jpg

3.jpg

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1楼2013-12-18 14:54:37

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pink3sky

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by wp870727290 at 2015-01-09 21:27:07
我也在做同样的酶切构建表达载体，虽说表达载体构建成功了，但是诱导表达的时候只有GST标签表达，没有目标蛋白的表达，不知道楼主这个实验做得怎么样？有没有出现我类似的情况呢？可否指教指教？

我的目的蛋白表达出来了，使用的是过柱纯化，也验证过了。你具体是什么问题？