| 查看: 1500 | 回复: 7 | |||
[求助]
设计引物装载体 求高手
|
| 设计引物一定要保证是3的倍数吗？如果不是3的倍数会不会载入载体后会发生移码吗？一般把目的片段装入载体时会考虑载体上的移码而不会考虑获得的PCR序列，到底要不要考虑呀，突然想到这个问题，有点头大 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有276人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助各位高手：做SSR分子标记时，只知道上下游引物,请问如何知道所需目的片段的大小
已经有9人回复
- PCR引物的量如何确定，求助高手指教
已经有11人回复
- 求引物设计高手
已经有9人回复
- 求高手指点：RT-PCR的引物设计
已经有18人回复
- 求高手指导，用软件设计PCR引物
已经有5人回复
- 请问微卫星引物开发的文章现在还有什么期刊可以接受？麻烦高手推荐下
已经有4人回复
- 自设简并引物几对，请高手帮检查下~~~
已经有18人回复
- 【求助/交流】ISSR引物扩增产物电泳图，求助各位高手~~~
已经有10人回复
gyesang: 屏蔽内容, 论坛没有广告！ 2013-11-27 01:40:08
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2013-11-26 23:16:13
zh10246
铁杆木虫 (文坛精英)
- 应助: 348 (大学生)
- 金币: 13530.5
- 散金: 115
- 红花: 47
- 帖子: 14591
- 在线: 881.4小时
- 虫号: 2786456
- 注册: 2013-11-08
- 专业: 细胞外基质
3楼2013-11-27 01:20:22
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
4楼2013-11-27 01:42:46
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-27 15:47:24
箫箫客: 金币+2, ★有帮助 2013-12-01 11:47:52
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-27 15:47:24
箫箫客: 金币+2, ★有帮助 2013-12-01 11:47:52
|
回答： 引物设计首先要针对你的实验目的。如果上载体，如果你的cDNA带有ATG，凡是没有N－端融合表达情况的，一般不用考虑3的倍数和ATG的问题。反之必须考虑ATG的情况，要保证不要出现移码问题，所以引物要考虑的因素要增加一个。多长倒不是大问题，配对区在18到20个左右，配对区TM合适，前面你想加多长理论上都可以。 建议用TOPO系列的载体，真核原核表达的都可以，一步PCR，不用回收，不用酶切，直接上TOPO载体连接，5分钟后转化感受态细胞，第二天挑克隆，最多第三天酶切得到合适的克隆；测序一天，第五天得到正确的质粒。 差不多是一周的时间得到，同时细胞或动物，或细菌在这周空闲时间准备好了，下周可以直接上。呵呵。 |
5楼2013-11-27 03:10:18
6楼2013-11-27 06:54:00
7楼2013-11-27 15:54:51
8楼2013-11-27 16:24:21
