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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因组DNA不纯 已有5人参与

我用试剂盒提取的基因组DNA,浓度很低只有二三十ng/ul,而且OD260/OD280比值在2.3左右,这样的DNA样品能用来做PCR吗
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

DNA样品能用来做PCR没有问题。你把你的引物做个梯度PCR找个合适的温度再扩一下目的基因。
hehe
8楼2014-03-18 22:51:29
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查看全部 8 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-14 17:02:46
做PCR是没有问题的,不知道你是从什么材料里面提取的,也可以用其他手动的而非试剂盒的方法提取,这样的话提取DNA的量可以大一些,不过做PCR的话,无所谓了
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-13 21:43:52
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 21:43:52
做PCR是没有问题的,不知道你是从什么材料里面提取的,也可以用其他手动的而非试剂盒的方法提取,这样的话提取DNA的量可以大一些,不过做PCR的话,无所谓了

我是从单头蚜虫里面提取的,我现在做PCR总是出现很多杂带,之前没出现过这情况,不知道是不是因为模板不纯造成的
3楼2013-12-14 09:37:00
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-14 17:02:52
PCR要求的DNA量非常低,杂带一般和模板没有关系的,是引物特异性差导致杂带太多:一是退火温度选择不合适,引物有了过多的非特异性匹配;更严重的可能就是引物设计时就没有设计好,这种情况就要重新设计引物了
4楼2013-12-14 13:08:07
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