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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组DNA不纯
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因组DNA不纯 已有5人参与

我用试剂盒提取的基因组DNA，浓度很低只有二三十ng/ul，而且OD260/OD280比值在2.3左右，这样的DNA样品能用来做PCR吗
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1楼 2013-12-13 20:51:11
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-14 17:02:46
做PCR是没有问题的，不知道你是从什么材料里面提取的，也可以用其他手动的而非试剂盒的方法提取，这样的话提取DNA的量可以大一些，不过做PCR的话，无所谓了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-13 21:43:52
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 21:43:52
做PCR是没有问题的，不知道你是从什么材料里面提取的，也可以用其他手动的而非试剂盒的方法提取，这样的话提取DNA的量可以大一些，不过做PCR的话，无所谓了

我是从单头蚜虫里面提取的，我现在做PCR总是出现很多杂带，之前没出现过这情况，不知道是不是因为模板不纯造成的
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3楼2013-12-14 09:37:00
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-14 17:02:52
PCR要求的DNA量非常低，杂带一般和模板没有关系的，是引物特异性差导致杂带太多：一是退火温度选择不合适，引物有了过多的非特异性匹配；更严重的可能就是引物设计时就没有设计好，这种情况就要重新设计引物了
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4楼2013-12-14 13:08:07
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-14 13:08:07
PCR要求的DNA量非常低，杂带一般和模板没有关系的，是引物特异性差导致杂带太多：一是退火温度选择不合适，引物有了过多的非特异性匹配；更严重的可能就是引物设计时就没有设计好，这种情况就要重新设计引物了

我用premier设计的引物，各项指标都是比较好的，能说一下怎么看引物的特异性吗？
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5楼2013-12-14 16:16:43
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-14 21:04:15
里面含有RNA，在放RNA酶的时候，注意一下时间和量，这不是大问题。
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轻描淡写，浓墨重彩。
6楼2013-12-14 20:49:24
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做PCR没问题，再抽提一下
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但愿人长久
7楼2013-12-16 09:09:53
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

DNA样品能用来做PCR没有问题。你把你的引物做个梯度PCR找个合适的温度再扩一下目的基因。
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hehe
8楼2014-03-18 22:51:29
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