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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组DNA不纯
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因组DNA不纯 已有5人参与

我用试剂盒提取的基因组DNA，浓度很低只有二三十ng/ul，而且OD260/OD280比值在2.3左右，这样的DNA样品能用来做PCR吗
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1楼 2013-12-13 20:51:11
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-14 17:02:46
做PCR是没有问题的，不知道你是从什么材料里面提取的，也可以用其他手动的而非试剂盒的方法提取，这样的话提取DNA的量可以大一些，不过做PCR的话，无所谓了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-13 21:43:52
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 21:43:52
做PCR是没有问题的，不知道你是从什么材料里面提取的，也可以用其他手动的而非试剂盒的方法提取，这样的话提取DNA的量可以大一些，不过做PCR的话，无所谓了

我是从单头蚜虫里面提取的，我现在做PCR总是出现很多杂带，之前没出现过这情况，不知道是不是因为模板不纯造成的
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3楼2013-12-14 09:37:00
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-14 17:02:52
PCR要求的DNA量非常低，杂带一般和模板没有关系的，是引物特异性差导致杂带太多：一是退火温度选择不合适，引物有了过多的非特异性匹配；更严重的可能就是引物设计时就没有设计好，这种情况就要重新设计引物了
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4楼2013-12-14 13:08:07
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-14 13:08:07
PCR要求的DNA量非常低，杂带一般和模板没有关系的，是引物特异性差导致杂带太多：一是退火温度选择不合适，引物有了过多的非特异性匹配；更严重的可能就是引物设计时就没有设计好，这种情况就要重新设计引物了

我用premier设计的引物，各项指标都是比较好的，能说一下怎么看引物的特异性吗？
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5楼2013-12-14 16:16:43
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-14 21:04:15
里面含有RNA，在放RNA酶的时候，注意一下时间和量，这不是大问题。
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轻描淡写，浓墨重彩。
6楼2013-12-14 20:49:24
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做PCR没问题，再抽提一下
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但愿人长久
7楼2013-12-16 09:09:53
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

DNA样品能用来做PCR没有问题。你把你的引物做个梯度PCR找个合适的温度再扩一下目的基因。
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hehe
8楼2014-03-18 22:51:29
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