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憨憨可爱多木虫 (正式写手)
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为什么我总是 提不纯DNA啊，
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| 为什么我用试剂盒总是提不纯植物DNA啊，提很多次了，每次都是提不纯，烦死了 |
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2楼2013-06-04 02:07:03
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1. 取植物新鲜组织0.1g，加入液氮充分研磨成粉末状。样品量不超过0.1g，过多的样品使得裂解不充分，最终会导致基因组DNA提取量减少。 2. 实验前，在1.5ml离心管中加入800ul的Lysis Buffer，于65℃下预热，然后加入β-巯基乙醇至终浓度为0.1%（0.8ul-1ul）。 3. 将研磨好的粉末加到以上预备好的Lysis Buffer中，65℃水浴20-30min，其间颠倒混匀样品数次。 4. 加入500ul氯仿，充分混匀，12000rpm离心5min。（若植物组织富含酚类、糖类（淀粉），应在此步骤前进行50ul酚：氯仿=1：1抽提一次） 5. 小心吸取上层水相转入一个新的离心管中，加入700ul Binging buffer，充分混匀。 6. 将混匀的液体转入离心柱中（可分次转入），12000rpm离心1min。 7. 加入700ul Wash Buffer A，12000rpm离心1min，弃废液。 8. 加入700ul Wash Buffer B，12000rpm离心1min，弃废液。 9. 加入500ul Wash Buffer B，12000rpm离心1min，弃废液。 10. 再次12000rpm离心2min，将离心柱置于新的离心管中，并打开离心柱盖，于室温或37℃放置5-10min，至无明显乙醇味。 11. 加入50-200ul（100ul）TE buffer（事先预热55-65℃），置于室温2-5min，12000rpm离心2min，离心管中即为所提取的基因组DNA溶液。 |
5楼2013-06-04 11:19:52
蓝慧
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