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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 哪位大神来告诉我，为什么最近提不出总DNA
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vivi忆默

新虫 (初入文坛)

[交流] 哪位大神来告诉我，为什么最近提不出总DNA 已有10人参与

我提的是窖池中微生物的总DNA，主要样品来源为大曲，窖泥，前段时间用上海生工的Ezup柱式基因组DNA抽提试剂盒（细菌），也用过生工的土壤基因组抽提试剂盒，可是就是没提出来，不知道什么原因，好着急，觉都睡不着了，都快一个月了，求各位大神指点。
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1楼 2013-01-10 21:59:55
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zhang881007

金虫 (小有名气)
★
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别急慢慢来。我的建议是你取大曲后，仅可能地用PBS洗涤，确保残留物为细胞后，再抽提。
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shine
3楼2013-01-11 08:56:51
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普通回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)
★
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以前可以现在不行肯定是有什么改变了啊 仔细排查
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2楼2013-01-11 03:01:55
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蜗牛-killer

金虫 (小有名气)
★
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我也是 最近总失败
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哇咔咔~
4楼2013-01-11 10:21:30
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fdzkfdzk1

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近也在做，就是土壤的微生物，我是通过把土壤上的微生物洗脱后，然后取上层清夜然后抽滤，得到菌体，再提DNA。一天中提了三次DNA，也是用试剂盒的，前两次都没提出来，后面加大菌量，同时菌的纯度通过多次离心洗涤也得到提高，最后柱式洗脱时，TE预热，室内放置几分钟后，100微的TE分两次洗涤的（即每次50微），最后提出来了，但是浓度有些偏低。所以个人拙见：认为提细菌总DNA的关键是菌量和菌的纯度（就是不要有其他杂质污染，这个在后续的过程中可能会堵塞柱子，导致后面DNA得率低，严重的时候根本得不到）。come on !cheer up!
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5楼2013-01-11 11:44:18
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jk_xdx

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用水浸土壤，再取上清，用SDS法提。
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6楼2013-01-11 13:37:38
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vivi忆默

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-11 03:01:55
以前可以现在不行肯定是有什么改变了啊 仔细排查

谢谢你的关注。基本上样品和试剂，还有方法都是和以前一样的，样品预处理了以后用试剂盒抽提，就是不知道天气太冷了会不会对效果有影响
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7楼2013-01-11 13:44:26
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小小_木虫

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不用试剂盒提取不行吗？
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8楼2013-01-12 10:13:46
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四裤全输123

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用MoBIo的powersoil或者MP的fast spin 试剂盒，效果不错
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9楼2013-01-12 13:15:11
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vivi忆默

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 蜗牛-killer at 2013-01-11 10:21:30
我也是 最近总失败

加油，好好摸索下方法，我也还是纠结中
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10楼2013-01-15 15:01:31
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