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vivi忆默

新虫 (初入文坛)

[交流] 哪位大神来告诉我,为什么最近提不出总DNA 已有10人参与

我提的是窖池中微生物的总DNA,主要样品来源为大曲,窖泥,前段时间用上海生工的Ezup柱式基因组DNA抽提试剂盒(细菌),也用过生工的土壤基因组抽提试剂盒,可是就是没提出来,不知道什么原因,好着急,觉都睡不着了,都快一个月了,求各位大神指点。
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zhang881007

金虫 (小有名气)

★
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别急慢慢来。我的建议是你取大曲后,仅可能地用PBS洗涤,确保残留物为细胞后,再抽提。
shine
3楼2013-01-11 08:56:51
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普通回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以前可以现在不行肯定是有什么改变了啊 仔细排查
2楼2013-01-11 03:01:55
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蜗牛-killer

金虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是 最近总失败
哇咔咔~
4楼2013-01-11 10:21:30
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fdzkfdzk1

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近也在做,就是土壤的微生物,我是通过把土壤上的微生物洗脱后,然后取上层清夜然后抽滤,得到菌体,再提DNA。一天中提了三次DNA,也是用试剂盒的,前两次都没提出来,后面加大菌量,同时菌的纯度通过多次离心洗涤也得到提高,最后柱式洗脱时,TE预热,室内放置几分钟后,100微的TE分两次洗涤的(即每次50微),最后提出来了,但是浓度有些偏低。所以个人拙见:认为提细菌总DNA的关键是菌量和菌的纯度(就是不要有其他杂质污染,这个在后续的过程中可能会堵塞柱子,导致后面DNA得率低,严重的时候根本得不到)。come on !cheer up!
5楼2013-01-11 11:44:18
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jk_xdx

银虫 (小有名气)

★
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用水浸土壤,再取上清,用SDS法提。
6楼2013-01-11 13:37:38
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vivi忆默

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-11 03:01:55
以前可以现在不行肯定是有什么改变了啊 仔细排查

谢谢你的关注。基本上样品和试剂,还有方法都是和以前一样的,样品预处理了以后用试剂盒抽提,就是不知道天气太冷了会不会对效果有影响
7楼2013-01-11 13:44:26
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小小_木虫

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不用试剂盒提取不行吗?
8楼2013-01-12 10:13:46
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四裤全输123

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用MoBIo的powersoil或者MP的fast spin 试剂盒,效果不错
9楼2013-01-12 13:15:11
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vivi忆默

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 蜗牛-killer at 2013-01-11 10:21:30
我也是 最近总失败

加油,好好摸索下方法,我也还是纠结中
10楼2013-01-15 15:01:31
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