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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么我总是 提不纯DNA啊，
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

[求助] 为什么我总是 提不纯DNA啊，

为什么我用试剂盒总是提不纯植物DNA啊，提很多次了，每次都是提不纯，烦死了
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1楼 2013-06-03 20:16:15
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-04 02:07:03
路过, 楼主的问题没法答呀, 实验过程什么的再描述详细点?

就是按照试剂盒说明的步骤做的啊，氯仿抽提，氯仿抽提了之后离心上清液有些浑浊，而且有的在上清液表层有一层绿色的膜，
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3楼2013-06-04 07:34:32
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
路过, 楼主的问题没法答呀, 实验过程什么的再描述详细点?
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2楼2013-06-04 02:07:03
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lion1998

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试剂盒也是有不同的，你不说是怎样步骤，别人也不可能知道是哪种试剂盒啊
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Iamaleafonthewind.
4楼2013-06-04 08:25:59
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)
1.        取植物新鲜组织0.1g，加入液氮充分研磨成粉末状。样品量不超过0.1g，过多的样品使得裂解不充分，最终会导致基因组DNA提取量减少。
2.        实验前，在1.5ml离心管中加入800ul的Lysis Buffer，于65℃下预热，然后加入β-巯基乙醇至终浓度为0.1%（0.8ul-1ul）。
3.        将研磨好的粉末加到以上预备好的Lysis Buffer中，65℃水浴20-30min，其间颠倒混匀样品数次。
4.        加入500ul氯仿，充分混匀，12000rpm离心5min。（若植物组织富含酚类、糖类（淀粉），应在此步骤前进行50ul酚：氯仿=1：1抽提一次）
5.        小心吸取上层水相转入一个新的离心管中，加入700ul Binging buffer，充分混匀。
6.        将混匀的液体转入离心柱中（可分次转入），12000rpm离心1min。
7.        加入700ul Wash Buffer A，12000rpm离心1min，弃废液。
8.        加入700ul Wash Buffer B，12000rpm离心1min，弃废液。
9.        加入500ul Wash Buffer B，12000rpm离心1min，弃废液。
10.        再次12000rpm离心2min，将离心柱置于新的离心管中，并打开离心柱盖，于室温或37℃放置5-10min，至无明显乙醇味。
11.        加入50-200ul（100ul）TE buffer（事先预热55-65℃），置于室温2-5min，12000rpm离心2min，离心管中即为所提取的基因组DNA溶液。
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5楼2013-06-04 11:19:52
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