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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急求，pcr扩增cDNA时扩增出了基因组的片段。接下来该怎么办。
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呼啸天下0

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求，pcr扩增cDNA时扩增出了基因组的片段。接下来该怎么办。 已有2人参与

我前阵子合成了鱼的cDNA一链。可能是反转之前基因组没能消化完全。我pcr扩增某个基因的时候扩增出的基因与我们的基因组文库比对发现和基因组文库有98%的相似率。而与dDNA. cds文库比对却中间有段300bp是缺失的。两头都能比对上（总长度1kb）。。我需要将这个基因够载体拿去真核细胞中表达。这个好像是有内含子的应该不能拿去表达吧。。求助。有没有好的建议我接下来该怎么办。
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1楼 2013-12-12 11:31:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-12 15:32:59
把RNA模板中的gDNA用DNase消化干净后重新反转录，获取cDNA后再PCR。
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3楼2013-12-12 13:50:41
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呼啸天下0

新虫 (初入文坛)
请各位同学多多帮助啊。我是重新合一链。还是可以有办法把内含子去掉啊。。   还有就是这个基因组预测有没有可能是假的。因为我们这个物种研究的人少。会不会是预测错误的基因组。
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2楼2013-12-12 11:46:14
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呼啸天下0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-12 13:50:41
把RNA模板中的gDNA用DNase消化干净后重新反转录，获取cDNA后再PCR。

肯定会用gDNase消化了的啊。而且我是跑胶检测之后发现没有了之后才反转的。可是还是p这样了。
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4楼2013-12-12 15:55:49
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mondy1981

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有时是会多的
可能你的序列才是真正对的
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5楼2013-12-13 00:59:00
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