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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 如何获取目的质粒？
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何获取目的质粒？

1.一个细菌里面有好几个质粒，用质粒提取试剂盒提出质粒，如何从这些质粒中获得携带有目的基因的质粒？求哪个大神指导一下
2.再弱弱的问一下如果以上提出的混合质粒，用PCR证实携带有目的基因，可以直接让测序公司质粒测序吗？
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1楼2013-12-11 08:34:08
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 屿iland at 2013-12-11 10:24:52
楼主这样不知可行不：先分离质粒（用电泳应该就可以办到），再胶回收（有试剂盒的），那么混合的质粒得到了分离，然后分别测试找到你要的目的基因的片段。

不知还有没有其他更好 ...

按照理论上这个应该可以的，不过我提出的质粒电泳大多数是三条条带，据说是一条是超螺旋的，一条是线性的，一条是环状的，那如果是这样怎么让质粒跑开呢？我是菜鸟，欢迎批评指正
   还有我的质粒marker是V517，按照道理能跑出7条条带，可我提出来的只有3条条带，为什么呀？
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5楼2013-12-12 08:44:16
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-11 09:59:38
我以前用的方法就是将提取的质粒再次转换，用抗生素多次筛选，直到获得纯的质粒；
混合质粒是不能测序的，不然有杂峰干扰，效果很差
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2楼2013-12-11 09:03:36
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屿iland

金虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-13 14:55:37
楼主这样不知可行不：先分离质粒（用电泳应该就可以办到），再胶回收（有试剂盒的），那么混合的质粒得到了分离，然后分别测试找到你要的目的基因的片段。

不知还有没有其他更好的方法，欢迎交流指正

祝楼主试验顺利
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3楼2013-12-11 10:24:52
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屿iland

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 屿iland at 2013-12-11 10:24:52
楼主这样不知可行不：先分离质粒（用电泳应该就可以办到），再胶回收（有试剂盒的），那么混合的质粒得到了分离，然后分别测试找到你要的目的基因的片段。

不知还有没有其他更好 ...

打错字了，是测序不是测试
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4楼2013-12-11 10:30:11
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