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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选……
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三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选……

嘿嘿，我做的pEASY-T1载体克隆转化，将目的片段连接到pEASY-T1，然后测序。为了较好的测序，我先做了蓝白斑筛选，是不是应该挑选蓝斑？因为蓝斑的质粒转入了细胞，没有重组。。。这个问题是不是很苍白无力……各位就忍住鄙视，帮忙说一下吧……嘿嘿……
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我不会！
1楼 2013-12-07 12:45:34
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-07 14:09:42
三蛰: 金币+5, ★有帮助 2013-12-08 22:38:29
应该挑白斑，篮斑的质粒没有被片段插入，所以能表达出完整的半乳糖苷酶α亚基，这样在蓝斑细胞内就可以形成完整有活性的半乳糖苷酶，从而催化Xgal反应生成蓝色物质显示出蓝斑，白斑菌落质粒被片段插入，编码半乳糖苷酶α亚基的序列被破坏，不能表达出完整α亚基，从而导致细胞内无半乳糖苷酶活性，不能催化显色。
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2楼2013-12-07 13:13:04
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-07 21:17:29
三蛰: 金币+2 2013-12-08 22:38:36
楼上回答很完整了，挑白斑

当然如果你的插入片段很小的话 lacZ也会表达 呈蓝斑状态
赞一下 回复此楼
借你一生好不好
3楼2013-12-07 15:43:49
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