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三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选……

嘿嘿,我做的pEASY-T1载体克隆转化,将目的片段连接到pEASY-T1,然后测序。为了较好的测序,我先做了蓝白斑筛选,是不是应该挑选蓝斑?因为蓝斑的质粒转入了细胞,没有重组。。。这个问题是不是很苍白无力……各位就忍住鄙视,帮忙说一下吧……嘿嘿……
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我不会!
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-07 14:09:42
三蛰: 金币+5, 有帮助 2013-12-08 22:38:29
应该挑白斑,篮斑的质粒没有被片段插入,所以能表达出完整的半乳糖苷酶α亚基,这样在蓝斑细胞内就可以形成完整有活性的半乳糖苷酶,从而催化Xgal反应生成蓝色物质显示出蓝斑,白斑菌落质粒被片段插入,编码半乳糖苷酶α亚基的序列被破坏,不能表达出完整α亚基,从而导致细胞内无半乳糖苷酶活性,不能催化显色。
2楼2013-12-07 13:13:04
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-07 21:17:29
三蛰: 金币+2 2013-12-08 22:38:36
楼上回答很完整了,挑白斑

当然如果你的插入片段很小的话 lacZ也会表达 呈蓝斑状态
借你一生好不好
3楼2013-12-07 15:43:49
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