24小时热门版块排行榜    

查看: 1727  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

判官小艾

木虫 (正式写手)

读研有时候需要的是勇气

[交流] 表达载体和目的片段链接问题 已有3人参与

载体是用的puc18目的片段式未知的(细菌基因组经sau3AI酶切的)要求片段大小是4-10kb的,链接是4度48H
链接体系是10ul T4ligase 5xbuffer 链接后电转用的感受态是大肠杆菌knabc一个耐盐缺陷株,电转电压时2500v 时间是4-5ms,但是板上就是没有阳性菌落,求给点建议,做了3个月了还没有进展
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

就让那流水带走光阴的故事
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

判官小艾

木虫 (正式写手)

读研有时候需要的是勇气

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-11-24 17:52:30
puc18 质粒太小 建议换个大容量质粒

师兄师姐都是用的这个载体,能得到阳性菌株
就让那流水带走光阴的故事
3楼2013-11-25 19:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-26 19:18:49
puc18 质粒太小 建议换个大容量质粒
借你一生好不好
2楼2013-11-25 13:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoyanfei

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-11-26 19:18:59
建议换成化学转化方法,因为电转化有一定的缺陷,我曾经也做过克隆的,电转化做了一个冬天还没成功,最后是用的化学转化法,就一次就成功了。希望对你有所帮助。
4楼2013-11-26 09:02:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

判官小艾

木虫 (正式写手)

读研有时候需要的是勇气

引用回帖:
4楼: Originally posted by guoyanfei at 2013-11-25 13:02:23
建议换成化学转化方法,因为电转化有一定的缺陷,我曾经也做过克隆的,电转化做了一个冬天还没成功,最后是用的化学转化法,就一次就成功了。希望对你有所帮助。

化转也做了但是很难得到阳性菌落,化转效率低,不如电转效率高,电转对感受态细胞影响较大,要求较高,我再摸摸试试。谢谢您
就让那流水带走光阴的故事
5楼2013-11-26 10:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见