24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1812  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

[求助] 连接问题求助高手

最近在做一个连接,载体单酶切后,直接用T4连接酶连接涂板后居然不长,去磷酸化后就更不长了,更不要提连接目的片段的体系了,求解,纠结非常
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 01:42:58
请检查一下载体的抗性

这个可以排除了。。。
6楼2013-11-06 22:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaopeiliang: 金币+1, 这个可以排除了 2013-11-06 22:49:38
请检查一下载体的抗性
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-06 01:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-06 08:28:22
xiaopeiliang: 金币+2, 有帮助, 尝试不同去磷酸化量就是为了不过度去磷酸化,想找个合适的量,能够让载体自连几个,不知道合理不,其它的都尝试过啦,不是原因 2013-11-06 22:51:23
确定T4 ligase是不是失效了。载体单酶切连接发生自连,去磷酸化是为了避免自连,当然不会长了。另外,你的感受态细胞是否好用,是否转了为经酶切的载体质粒作为正对照?
3楼2013-11-06 07:44:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-06 10:17:27
xiaopeiliang: 金币+2, 有帮助, 载体对照没有问题,其它的也尝试过啦 2013-11-06 22:52:22
第一:做个没有酶切的载体转化感受态做对照;第二:连接酶连其他东西看是不是失效;第三:抗生素有没有搞错;第四:培养条件是否正确;第五:转化条件是否正确。确定了这些问题之后,肯定会找到原因。
4楼2013-11-06 08:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +7 c297914 2026-03-28 7/350 2026-03-29 01:17 by 544594351
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 0856求调剂 +6 楒桉 2026-03-28 6/300 2026-03-29 00:31 by 544594351
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +11 zhubinhao 2026-03-27 11/550 2026-03-28 20:22 by 418490947
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 347求调剂 +3 山顶见α 2026-03-25 3/150 2026-03-28 14:13 by 唐沐儿
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +6 脚滑的守法公民 2026-03-27 6/300 2026-03-28 11:02 by gjlllb
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 0703化学求调剂,各位老师看看我!!! +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
信息提示
请填处理意见