应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 外源蛋白在毕赤酵母中不表达
51/1返回列表
查看: 2385  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

runying36

银虫 (正式写手)

[求助] 外源蛋白在毕赤酵母中不表达

有哪位热心的战友给提示一下，我的外源蛋白在毕赤酵母中不表达，实验室同期做得都有表达，说明系统没有问题，但我的为什么没表达？有么有实战经验，一般这种情况先从哪方面试比较靠谱？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-04 16:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runying36

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luyongchao at 2013-11-05 11:42:14
电泳能看到条带吗，我的表达量也很低，只是WB的结果，他们说的方法我们都试过了，还是很低啊，怎么办怎么办！...

我目前也只是用WB检测出来的，但根据我们实验室的经验，曝光1分钟的阳性克隆就可以纯化出重组蛋白。我觉得你可以先不管SDS-page的结果，如果是需要重组蛋白就先纯化，如果只是拿粗提液做实验就直接做，不要浪费精力在不停地提高产量上。
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-05 15:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
runying36: 金币+1, ★有帮助, 做了WB没检测到信号 2013-11-05 01:02:21
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 12:41:56
不表达还是表达量低，有没有做WB检测下；
如果是不表达：考虑目的基因有没有启动子；再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低：可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系，可以考虑优化密码子；  或者体内体外构建多拷贝增加表达量，发酵条件的筛选也可以尝试
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-04 21:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
runying36: 金币+1, ★有帮助, 做了WB没检测到信号，这样不知道优化这些方面会不会有实质性改变 2013-11-05 01:03:05
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 12:42:03
酵母表达影响因素很多：比较重要的考虑甲醇的量，诱导温度，诱导时间，接种量和酸碱度等，还有就是你的蛋白可能表达了，只是检测方法不当也不无可能，有标签的蛋白建议做WB；还有酵母表达有糖基化修饰，会导致实际蛋白大小比理论值要大一些。
赞一下 回复此楼
爱拼才会赢
3楼2013-11-04 21:50:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-11-04 21:48:47
不表达还是表达量低，有没有做WB检测下；
如果是不表达：考虑目的基因有没有启动子；再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低：可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系，可以考虑优化密码子；  或者体内体外构建 ...

拷贝数的增加并不一定能增加蛋白表达量，只是理论上有可能而已。
赞一下 回复此楼
爱拼才会赢
4楼2013-11-04 21:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭