24小时热门版块排行榜    

查看: 2872  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

runying36

银虫 (正式写手)

[求助] 外源蛋白在毕赤酵母中不表达

有哪位热心的战友给提示一下,我的外源蛋白在毕赤酵母中不表达,实验室同期做得都有表达,说明系统没有问题,但我的为什么没表达?有么有实战经验,一般这种情况先从哪方面试比较靠谱?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runying36

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by luyongchao at 2013-11-05 11:42:14
电泳能看到条带吗,我的表达量也很低,只是WB的结果,他们说的方法我们都试过了,还是很低啊,怎么办怎么办!...

我目前也只是用WB检测出来的,但根据我们实验室的经验,曝光1分钟的阳性克隆就可以纯化出重组蛋白。我觉得你可以先不管SDS-page的结果,如果是需要重组蛋白就先纯化,如果只是拿粗提液做实验就直接做,不要浪费精力在不停地提高产量上。
9楼2013-11-05 15:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
runying36: 金币+1, 有帮助, 做了WB没检测到信号 2013-11-05 01:02:21
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-05 12:41:56
不表达还是表达量低,有没有做WB检测下;
如果是不表达:考虑目的基因有没有启动子;再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低:可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系,可以考虑优化密码子;  或者体内体外构建多拷贝增加表达量,发酵条件的筛选也可以尝试
2楼2013-11-04 21:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
runying36: 金币+1, 有帮助, 做了WB没检测到信号,这样不知道优化这些方面会不会有实质性改变 2013-11-05 01:03:05
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-05 12:42:03
酵母表达影响因素很多:比较重要的考虑甲醇的量,诱导温度,诱导时间,接种量和酸碱度等,还有就是你的蛋白可能表达了,只是检测方法不当也不无可能,有标签的蛋白建议做WB;还有酵母表达有糖基化修饰,会导致实际蛋白大小比理论值要大一些。
爱拼才会赢
3楼2013-11-04 21:50:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-11-04 21:48:47
不表达还是表达量低,有没有做WB检测下;
如果是不表达:考虑目的基因有没有启动子;再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低:可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系,可以考虑优化密码子;  或者体内体外构建 ...

拷贝数的增加并不一定能增加蛋白表达量,只是理论上有可能而已。
爱拼才会赢
4楼2013-11-04 21:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见