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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 外源蛋白在毕赤酵母中不表达
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runying36

银虫 (正式写手)

[求助] 外源蛋白在毕赤酵母中不表达

有哪位热心的战友给提示一下，我的外源蛋白在毕赤酵母中不表达，实验室同期做得都有表达，说明系统没有问题，但我的为什么没表达？有么有实战经验，一般这种情况先从哪方面试比较靠谱？
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1楼 2013-11-04 16:58:21
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runying36

银虫 (正式写手)
谢谢楼上各位的热心回应，我今天很高兴地告诉大家我已经优化出来了，其实就是改变了一下pH值从7.4降下来的几个看来都有效果。谢谢了！
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7楼2013-11-05 11:32:30
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runying36

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luyongchao at 2013-11-05 11:42:14
电泳能看到条带吗，我的表达量也很低，只是WB的结果，他们说的方法我们都试过了，还是很低啊，怎么办怎么办！...

我目前也只是用WB检测出来的，但根据我们实验室的经验，曝光1分钟的阳性克隆就可以纯化出重组蛋白。我觉得你可以先不管SDS-page的结果，如果是需要重组蛋白就先纯化，如果只是拿粗提液做实验就直接做，不要浪费精力在不停地提高产量上。
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9楼2013-11-05 15:48:29
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runying36

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by luyongchao at 2013-11-06 15:51:04
表达量太低，应该纯化不出来吧!...

如果实在是要纯化出蛋白，只要检测到有存在，还是可以想办法优化的，这只有自己试试看了
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11楼2013-11-06 21:53:15
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runying36

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by luyongchao at 2013-11-06 15:51:04
表达量太低，应该纯化不出来吧!...

如果单因素的条件不能改变状况，可以试试用正交分析多因素的作用，祝好运
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12楼2013-11-06 21:55:03
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runying36

银虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by gerileyy at 2013-11-18 10:02:35
楼主 您好！您有酵母分泌表达检测的蛋白电泳图么、？...

我是直接用WB 检测的，因为有些量比较少SDS不容易判断
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15楼2013-11-18 10:36:07
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runying36

银虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 省心小姐 at 2014-09-17 15:21:46
具体甲醇的量应该加多少？过多会导致什么结果？...

甲醇量没优化过奥，就是0.5%
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17楼2014-09-18 06:45:34
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