应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 外源蛋白在毕赤酵母中不表达
51/1返回列表
查看: 2516  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

runying36

银虫 (正式写手)

[求助] 外源蛋白在毕赤酵母中不表达

有哪位热心的战友给提示一下，我的外源蛋白在毕赤酵母中不表达，实验室同期做得都有表达，说明系统没有问题，但我的为什么没表达？有么有实战经验，一般这种情况先从哪方面试比较靠谱？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-04 16:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luyongchao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by runying36 at 2013-11-05 11:32:30
谢谢楼上各位的热心回应，我今天很高兴地告诉大家我已经优化出来了，其实就是改变了一下pH值从7.4降下来的几个看来都有效果。谢谢了！

电泳能看到条带吗，我的表达量也很低，只是WB的结果，他们说的方法我们都试过了，还是很低啊，怎么办怎么办！
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-05 11:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
runying36: 金币+1, ★有帮助, 做了WB没检测到信号 2013-11-05 01:02:21
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 12:41:56
不表达还是表达量低，有没有做WB检测下；
如果是不表达：考虑目的基因有没有启动子；再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低：可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系，可以考虑优化密码子；  或者体内体外构建多拷贝增加表达量，发酵条件的筛选也可以尝试
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-04 21:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
runying36: 金币+1, ★有帮助, 做了WB没检测到信号，这样不知道优化这些方面会不会有实质性改变 2013-11-05 01:03:05
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 12:42:03
酵母表达影响因素很多：比较重要的考虑甲醇的量，诱导温度，诱导时间，接种量和酸碱度等，还有就是你的蛋白可能表达了，只是检测方法不当也不无可能，有标签的蛋白建议做WB；还有酵母表达有糖基化修饰，会导致实际蛋白大小比理论值要大一些。
赞一下 回复此楼
爱拼才会赢
3楼2013-11-04 21:50:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-11-04 21:48:47
不表达还是表达量低，有没有做WB检测下；
如果是不表达：考虑目的基因有没有启动子；再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低：可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系，可以考虑优化密码子；  或者体内体外构建 ...

拷贝数的增加并不一定能增加蛋白表达量，只是理论上有可能而已。
赞一下 回复此楼
爱拼才会赢
4楼2013-11-04 21:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 成果系统访问量大，请15分钟后再尝试。由此给您造成的不便，敬请谅解。 +7 xhuama 2026-03-02 8/400 2026-03-02 22:33 by taidy
[考研] 调剂 +5 13853210211 2026-03-02 6/300 2026-03-02 22:10 by 无际的草原
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+6 vida_a 2026-03-01 18/900 2026-03-02 22:08 by sunny81
[考研] 调剂材料学硕 +3 词凝Y 2026-03-02 3/150 2026-03-02 21:51 by 杨杨杨紫
[考研] 接收调剂 +6 津萌津萌 2026-03-02 14/700 2026-03-02 20:59 by 汪！？！
[考研] 085600求调剂 +4 LRZZZZZZ 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:33 by 云旗yunqi
[考研] 中国科学技术大学材料与化工281求调剂，有科研和获奖经历 +5 wsxw 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:12 by hypershenger
[考研] 0805总分292，求调剂 +10 幻想之殇 2026-03-01 10/500 2026-03-02 19:51 by zhukairuo
[考研] 0854总分272 +3 打小就是老实人 2026-03-02 4/200 2026-03-02 19:49 by 求调剂zz
[考研] 化工京区271求调剂 +6 11ing 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:52 by caszguilin
[考研] 一志愿山东大学材料与化工325求调剂 +5 半截的诗0927 2026-03-02 5/250 2026-03-02 18:37 by 明亮9527
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 281求调剂 +5 2026计算机_诚心 2026-03-01 8/400 2026-03-02 11:05 by 汪！？！
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭