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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 外源蛋白在毕赤酵母中不表达
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runying36

银虫 (正式写手)

[求助] 外源蛋白在毕赤酵母中不表达

有哪位热心的战友给提示一下，我的外源蛋白在毕赤酵母中不表达，实验室同期做得都有表达，说明系统没有问题，但我的为什么没表达？有么有实战经验，一般这种情况先从哪方面试比较靠谱？
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1楼 2013-11-04 16:58:21
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runying36

银虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 省心小姐 at 2014-09-17 15:21:46
具体甲醇的量应该加多少？过多会导致什么结果？...

甲醇量没优化过奥，就是0.5%
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17楼2014-09-18 06:45:34
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
runying36: 金币+1, ★有帮助, 做了WB没检测到信号 2013-11-05 01:02:21
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 12:41:56
不表达还是表达量低，有没有做WB检测下；
如果是不表达：考虑目的基因有没有启动子；再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低：可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系，可以考虑优化密码子；  或者体内体外构建多拷贝增加表达量，发酵条件的筛选也可以尝试
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2楼2013-11-04 21:48:47
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
runying36: 金币+1, ★有帮助, 做了WB没检测到信号，这样不知道优化这些方面会不会有实质性改变 2013-11-05 01:03:05
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 12:42:03
酵母表达影响因素很多：比较重要的考虑甲醇的量，诱导温度，诱导时间，接种量和酸碱度等，还有就是你的蛋白可能表达了，只是检测方法不当也不无可能，有标签的蛋白建议做WB；还有酵母表达有糖基化修饰，会导致实际蛋白大小比理论值要大一些。
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爱拼才会赢
3楼2013-11-04 21:50:49
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-11-04 21:48:47
不表达还是表达量低，有没有做WB检测下；
如果是不表达：考虑目的基因有没有启动子；再就是考虑重组转化的问题了。
如果表达量低：可能是基因序列不适合毕赤酵母表达体系，可以考虑优化密码子；  或者体内体外构建 ...

拷贝数的增加并不一定能增加蛋白表达量，只是理论上有可能而已。
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爱拼才会赢
4楼2013-11-04 21:52:36
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