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winnerfc

新虫 (小有名气)

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[交流] 菌液pcr总是做不出！求高手解答！

我用takara的rTAQ酶做菌液PCR，总是没有目的条带，只有引物带，抽质粒酶切鉴定后证明是有阳性菌的，可是菌液pcr上没有条带。

我用的体系如下： rtaq酶 5ul，引物1 0.2ul，引物2 0.2ul，菌液 1ul ，去离子水 3.6ul。 pcr程序就是用的rtaq酶说明书上的程序。（我换了一个高保真的酶也做过，是可以扩出目的条带的）

到底问题出在哪里呢？

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1楼2013-11-01 09:38:00

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winnerfc

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137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2013-11-02 14:22:52

引用回帖:

2楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2013-11-01 11:44:05
你可以用质粒作为模板来扩，质粒需要稀释，根据跑胶浓度来确定怎么稀释。一般是稀释50~100倍。有时候因为仪器或者程序设置原因导致菌液里的菌体细胞壁不能完全破坏，不能释放出DNA，没有模板的话肯定扩不出来的。可 ...

你说得对！我先把菌液稀释了十倍，在pcr上95°跑了五分钟，之后离心取上清1ul，再做菌液pcr是可以扩出条带的！我估计之前是因为菌液没有完全破壁才扩不出来的。