24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

winnerfc

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 611.8
帖子: 123
在线: 53.8小时
虫号: 1293788

[交流] 菌液pcr总是做不出！求高手解答！

我用takara的rTAQ酶做菌液PCR，总是没有目的条带，只有引物带，抽质粒酶切鉴定后证明是有阳性菌的，可是菌液pcr上没有条带。

我用的体系如下： rtaq酶 5ul，引物1 0.2ul，引物2 0.2ul，菌液 1ul ，去离子水 3.6ul。 pcr程序就是用的rtaq酶说明书上的程序。（我换了一个高保真的酶也做过，是可以扩出目的条带的）

到底问题出在哪里呢？

回复此楼

» 猜你喜欢

磺酰氟产物，毕不了业了！已经有4人回复
论文终于录用啦！满足毕业条件了已经有16人回复
求个博导看看已经有19人回复
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球已经有8人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

PCR重复不出来已经有7人回复
pcr的温度及时间的选择已经有8人回复
转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~ 已经有14人回复
PCR出现非特异性扩增，求高手解答已经有9人回复
菌液pcr出来后，质粒提不出，测序老失败？已经有6人回复
PCR试剂和DNA模版加了以后，不马上跑PCR，可以先放PCR管在-20度吗已经有23人回复
PCR重复不出来已经有20人回复
菌液pcr有带，扩大培养摇不起来已经有11人回复
PCR标准体系有关问题。。求高手解答已经有5人回复
overlap PCR做不出来呐。。。。已经有23人回复
菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助已经有31人回复
求帮忙分析下菌液PCR检测结果已经有19人回复
请教各位前辈为什么我做菌落PCR总也P不出来已经有28人回复
求助PCR老是跑不出条带已经有16人回复
【求助/交流】菌落PCR结果（望高手进来拆招……本人第一次做TA克隆，么经验）已经有11人回复
【求助/交流】菌液PCR结束，肉眼直接看到条带可能不？已经有15人回复
【求助/交流】pcr p不出特异性条带已经有13人回复
【求助/交流】PCR 总是没P出来已经有21人回复
【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因已经有12人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2013-11-01 09:38:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

winnerfc

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 611.8
帖子: 123
在线: 53.8小时
虫号: 1293788

★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2013-11-02 14:22:52

引用回帖:

2楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2013-11-01 11:44:05
你可以用质粒作为模板来扩，质粒需要稀释，根据跑胶浓度来确定怎么稀释。一般是稀释50~100倍。有时候因为仪器或者程序设置原因导致菌液里的菌体细胞壁不能完全破坏，不能释放出DNA，没有模板的话肯定扩不出来的。可 ...

你说得对！我先把菌液稀释了十倍，在pcr上95°跑了五分钟，之后离心取上清1ul，再做菌液pcr是可以扩出条带的！我估计之前是因为菌液没有完全破壁才扩不出来的。