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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达蛋白复性的具体方案
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514278815

木虫 (小有名气)

[求助] 原核表达蛋白复性的具体方案

原核表达复性做了一个月了，纯出来的量很少，希望虫友们给点建议吧，最好有详细的步骤；
   由于需要的蛋白量较大，我才用的是柱复性；包涵体超声破碎后，用洗涤液洗好后重溶到含8M尿素的缓冲液中；复性采用梯度复性8M-2M的梯度在superdex-75上复性；复性后进行透析，透析时出现沉淀，开始怀疑透析梯度大过快了，就采用柱上缓慢换液，发现换液效果不好，真正到达目的缓冲液的蛋白很少；怀疑蛋白在柱子上析出来了。希望虫友给些建议吧，目前怀疑蛋白复性效果不佳，希望能给一个合理的柱上复性方案
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1楼 2013-11-01 07:44:47
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欧阳-90

银虫 (小有名气)
你可以使用其他的复性方法吗？比如稀释复性？
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4楼2013-11-02 16:40:32
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shenlin0514

木虫 (正式写手)

无名小虫

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-01 11:35:41
514278815: 金币+55 2013-11-01 19:52:18
建议你再分析一下该蛋白的二级结构，是否存在大量的疏水区域，有时添加Tag可以帮助其复性。另外，可以考虑表面活性剂的使用。
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Never say never
2楼2013-11-01 10:33:59
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514278815

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shenlin0514 at 2013-11-01 10:33:59
建议你再分析一下该蛋白的二级结构，是否存在大量的疏水区域，有时添加Tag可以帮助其复性。另外，可以考虑表面活性剂的使用。

终于有大哥回复了，序列已经设计好了，没法再弄Tag了，表面活性剂具体的怎么弄呀？
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3楼2013-11-01 19:55:16
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514278815

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 欧阳-90 at 2013-11-02 16:40:32
你可以使用其他的复性方法吗？比如稀释复性？

蛋白需要量较大，其他方法得率较低吧
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5楼2013-11-02 17:36:58
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