| 查看: 2644 | 回复: 14 | ||||
514278815木虫 (小有名气)
|
[求助]
原核表达蛋白复性的具体方案
|
|||
|
原核表达复性做了一个月了，纯出来的量很少，希望虫友们给点建议吧，最好有详细的步骤； 由于需要的蛋白量较大，我才用的是柱复性；包涵体超声破碎后，用洗涤液洗好后重溶到含8M尿素的缓冲液中；复性采用梯度复性8M-2M的梯度在superdex-75上复性；复性后进行透析，透析时出现沉淀，开始怀疑透析梯度大过快了，就采用柱上缓慢换液，发现换液效果不好，真正到达目的缓冲液的蛋白很少；怀疑蛋白在柱子上析出来了。希望虫友给些建议吧，目前怀疑蛋白复性效果不佳，希望能给一个合理的柱上复性方案 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有113人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核上清表达条件
已经有6人回复
- 原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办
已经有9人回复
- 原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办
已经有18人回复
- 原核表达 蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊
已经有12人回复
- 蛋白表达不出来，是什么原因造成的
已经有7人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- 原核表达蛋白变小
已经有4人回复
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 透析 蛋白沉淀 复性
已经有22人回复
- 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
已经有18人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- pet30a原核表达蛋白大小问题
已经有4人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 原核表达系统不表达目的蛋白
已经有8人回复
- 【求助/交流】如何让一个蛋白在原核细胞中表达
已经有3人回复
- 【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白
已经有15人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
9楼2013-11-04 12:21:31
shenlin0514
木虫 (正式写手)
无名小虫
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 3197.3
- 散金: 897
- 红花: 3
- 帖子: 810
- 在线: 100.3小时
- 虫号: 299250
- 注册: 2006-11-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
2楼2013-11-01 10:33:59
shenlin0514
木虫 (正式写手)
无名小虫
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 3197.3
- 散金: 897
- 红花: 3
- 帖子: 810
- 在线: 100.3小时
- 虫号: 299250
- 注册: 2006-11-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
6楼2013-11-03 22:18:17
514278815
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2857.6
- 散金: 200
- 红花: 3
- 帖子: 137
- 在线: 107.2小时
- 虫号: 2458441
- 注册: 2013-05-10
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
7楼2013-11-04 09:56:29
514278815
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2857.6
- 散金: 200
- 红花: 3
- 帖子: 137
- 在线: 107.2小时
- 虫号: 2458441
- 注册: 2013-05-10
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
3楼2013-11-01 19:55:16
4楼2013-11-02 16:40:32
514278815
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2857.6
- 散金: 200
- 红花: 3
- 帖子: 137
- 在线: 107.2小时
- 虫号: 2458441
- 注册: 2013-05-10
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
5楼2013-11-02 17:36:58
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
|
这不就是包涵体复性的问题吗？要加什么标签呀！ 请见： Purification of inclusion bodies and refolding of proteins http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html |
8楼2013-11-04 12:17:16
沙门小rna
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 1117.7
- 散金: 5
- 红花: 6
- 沙发: 6
- 帖子: 644
- 在线: 76.7小时
- 虫号: 2012528
- 注册: 2012-09-19
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
能不能也给点建议~如何复。10楼2013-11-04 12:48:31
10