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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达蛋白复性的具体方案
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514278815

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-11-04 12:17:16
这不就是包涵体复性的问题吗？要加什么标签呀！

请见：
Purification of inclusion bodies and refolding of proteins
http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html

我们使用的superdex75复性不用标签的，复兴后上阳离子柱；你发的这篇我看过的。
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11楼2013-11-05 08:19:52
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514278815

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-11-04 12:21:31
能够是的蛋白质溶解于水溶液不是复性，蛋白质复性首先要有生物活性，SDS变性蛋白质后照样能够使蛋白质溶解！加入表面活性剂可能使得蛋白质溶解于水溶液，但是不一定就是蛋白质复性！

与蛋白质活性有关的东东都要去掉的，我们后期做细胞的，要求比较严。
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12楼2013-11-05 08:21:58
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514278815

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-04 12:48:31
虽然有道理，但是不明觉厉啊。能不能也给点建议~如何复。
我师妹做了个蛋白表达出来都在沉淀里。请指教~...

那就是形成包涵体了，低温诱导可以试试。
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13楼2013-11-05 08:22:58
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 514278815 at 2013-11-05 08:22:58
那就是形成包涵体了，低温诱导可以试试。...

嗯嗯
感谢亲

[ 发自小木虫客户端 ]
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
14楼2013-11-05 08:44:01
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shenlin0514

木虫 (正式写手)

无名小虫
引用回帖:
7楼: Originally posted by 514278815 at 2013-11-04 09:56:29
柱复性我这实验室以后会经常用，所以想具体研究下解决办法；tritonx-100我们也使用了。...

我建议你还是加一下tag试试是否可以增溶，我在公司做克隆一般都是三种一起，N端his，C端his和不带标签的，大量实验（20多种抗原和10多种酶）证明还是加了标签的可溶性要好很多，就算是包涵体，复性也相对容易。
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Never say never
15楼2013-11-06 09:24:19
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