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514278815木虫 (小有名气)
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[求助]
原核表达蛋白复性的具体方案
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原核表达复性做了一个月了，纯出来的量很少，希望虫友们给点建议吧，最好有详细的步骤； 由于需要的蛋白量较大，我才用的是柱复性；包涵体超声破碎后，用洗涤液洗好后重溶到含8M尿素的缓冲液中；复性采用梯度复性8M-2M的梯度在superdex-75上复性；复性后进行透析，透析时出现沉淀，开始怀疑透析梯度大过快了，就采用柱上缓慢换液，发现换液效果不好，真正到达目的缓冲液的蛋白很少；怀疑蛋白在柱子上析出来了。希望虫友给些建议吧，目前怀疑蛋白复性效果不佳，希望能给一个合理的柱上复性方案 |
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