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落满夏天

银虫 (正式写手)

[交流] 原核上清表达条件

有没有高手做过原核的上清表达，请问是从发酵上控制参数还是从菌种构建上下功夫，另外疏水性强的蛋白是不是只能做包涵体表达？小弟这块比较薄弱，感激不尽。

[ Last edited by 落满夏天 on 2013-10-14 at 12:13 ]
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1楼 2013-10-14 12:06:20
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tigerwei

木虫 (小有名气)
★
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首先从质粒构建开始，疏水性强的蛋白也可能上清表达。
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2楼2013-10-14 12:58:52
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落满夏天

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tigerwei at 2013-10-14 12:58:52
首先从质粒构建开始，疏水性强的蛋白也可能上清表达。

需要信号肽吗？
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3楼2013-10-15 08:08:35
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wushm388

银虫 (小有名气)
★
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原核分泌表达，信号肽是必须的，疏水性强的蛋白可尝试添加标签蛋白，如GST融合表达。
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4楼2013-10-15 11:29:59
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tigerwei

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 落满夏天 at 2013-10-15 08:08:35
需要信号肽吗？...

信号肽或其它类似功能序列。
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5楼2013-10-24 09:27:52
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古月问你哦

铜虫 (小有名气)
★
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如果是原核分泌表达还是做真核蛋白表达吧，原核不适合做分泌表达信号肽对原核系统来说会导致可溶性差上清基本不出现，真核系统做个瞬时转染也很简单只是表达的量少
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6楼2015-11-05 13:59:14
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lhczj

金虫 (小有名气)
★
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通常是从上游构建上下功夫，能够从根本上解决问题，通过发酵控制上能够解决，但也不绝对，相对付出的要大一些，另外看你干什么用，通常会需要对标签进行切割，这样会损失收率。如果解决不了包涵体也是一种选择，毕竟表达的蛋白量大，即使复性后蛋白量还是蛮大的。
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7楼2015-11-13 14:46:41
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