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SDS-PAGE中蛋白条带位置不一致
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| 前后几次SDS-PAGE中，同样的样品跑出来的蛋白条带位置与Marker对比不一样，第一次跑的时候，我要的目的蛋白条带与Marker 的25 kd 的带几乎一样大，但是后来跑的时候那条带又比Marker 25 KD 的带大了，在它上边，哪位大侠知道这是什么原因呀？！ |
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 蛋白质生物学实验经验 | 蛋白表达纯化与检测 |
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2楼2013-10-23 10:40:00
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【答案】应助回帖
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如果真的形成分子间的二硫键或酰胺键或者其他的共价键，SDS是不可能对其加以断裂和直接的阻止分子间的二硫键或酰胺键的形成的；因为要可能形成分子间的二硫键或酰胺键的氨基酸侧链基团在变性的蛋白质中处于分子表面，而且PH和反应物浓度合适又处于溶液环境和暴露于空气中，SDS是不可能阻碍两个巯基氧化为一个二硫键和羧基与氨基形成酰胺键。SDS使得蛋白质变性成为直的杆状分子倒是有可能在一定程度上消除球形蛋白质的空间位阻，当然SDS结合上蛋白质表面有形成新的空间位阻，但是SDS不可能每时每刻都结合在蛋白质的表面，而且对于杆状的蛋白质的末端SDS是封堵不住的。再有，蛋白质也许原来就有二硫键存在，SDS本身是不可能打开二硫键的，当然如果上样时加上DTT，巯基乙醇当然能打开二硫键，但是SDS-PAGE不是一定要加上DTT，巯基乙醇，楼主也没有提供此种信息。 何况即使加了DTT，巯基乙醇，酰胺键在一定条件下还是会形成，与SDS无关。 所以4楼的说法不对！ 其他的共价键情况很复杂，这里不讨论。 |
8楼2013-10-24 01:19:59
3楼2013-10-23 12:16:58
20083630zhan
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