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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE中蛋白条带位置不一致
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE中蛋白条带位置不一致

前后几次SDS-PAGE中，同样的样品跑出来的蛋白条带位置与Marker对比不一样，第一次跑的时候，我要的目的蛋白条带与Marker 的25 kd 的带几乎一样大，但是后来跑的时候那条带又比Marker 25 KD 的带大了，在它上边，哪位大侠知道这是什么原因呀？！
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1楼 2013-10-23 09:35:08
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:31:23
不可能是蛋白质凝聚产生的，因为你做SDS-PAGE时，你已经将你的目的蛋白变性，因此不存在分子间的二硫键，也更无分子间构象改变一说，如果实在你要确定你的蛋白的分子量，那么你可以做迁移率实验，将你的蛋白Marker 做迁移率试验，得到标曲，然后再用你的目的蛋白做迁移率实验，再通过标曲找到对应的分子量
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4楼2013-10-23 22:42:04
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-24 00:31:07
如果没有改变电泳胶和缓冲溶液的浓度和类型，那么最有可能是你的样品蛋白质有凝聚或者共价修饰出现或较大的构象改变，Marker存在降解或较大的构象改变。检测构象改变的方法可以用红外、紫外对比不同批次的样品和Marker，检测是否有降解降解或者共价修饰可用质谱检测不同批次的样品和Marker。
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2楼2013-10-23 10:40:00
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-10-23 10:40:00
如果没有改变电泳胶和缓冲溶液的浓度和类型，那么最有可能是你的样品蛋白质有凝聚或者共价修饰出现或较大的构象改变，Marker存在降解或较大的构象改变。检测构象改变的方法可以用红外、紫外对比不同批次的样品和Mar ...

额，这样啊，我同学的蛋白条带也是这样，难道我们的样品都有问题了？
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3楼2013-10-23 12:16:58
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-10-23 22:42:04
不可能是蛋白质凝聚产生的，因为你做SDS-PAGE时，你已经将你的目的蛋白变性，因此不存在分子间的二硫键，也更无分子间构象改变一说，如果实在你要确定你的蛋白的分子量，那么你可以做迁移率实验，将你的蛋白Marker  ...

SDS会引起蛋白质变性不假，但是SDS会引起蛋白质的螺旋构象增加而不是减少！变性本身不会断裂二硫键！SDS更不会！
蛋白质分子间的非共价的凝聚作用应该不大可能，但是共价修饰和二硫键连接是可能的，只要在空气中蛋白质的游离巯基就会氧化成二硫键，SDS无法阻止蛋白质的游离巯基就会氧化成二硫键，DTT和巯基乙醇才能解开二硫键。所以蛋白质分子间凝聚是可能的！
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5楼2013-10-24 00:58:34
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