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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE中蛋白条带位置不一致
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE中蛋白条带位置不一致

前后几次SDS-PAGE中，同样的样品跑出来的蛋白条带位置与Marker对比不一样，第一次跑的时候，我要的目的蛋白条带与Marker 的25 kd 的带几乎一样大，但是后来跑的时候那条带又比Marker 25 KD 的带大了，在它上边，哪位大侠知道这是什么原因呀？！
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1楼 2013-10-23 09:35:08
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-10-23 10:40:00
如果没有改变电泳胶和缓冲溶液的浓度和类型，那么最有可能是你的样品蛋白质有凝聚或者共价修饰出现或较大的构象改变，Marker存在降解或较大的构象改变。检测构象改变的方法可以用红外、紫外对比不同批次的样品和Mar ...

额，这样啊，我同学的蛋白条带也是这样，难道我们的样品都有问题了？
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3楼2013-10-23 12:16:58
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-10-24 23:11:24
这同样有一个具体β-巯基乙醇的量的问题，不是非黑即白的问题，而且β-巯基乙醇不能阻止酰胺键的形成。...

上样缓冲液中含有 DTT ，5乘的loading bufferDTT量为500mM.应该不会有二硫键了吧
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12楼2013-10-25 13:59:44
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