| 查看: 3772 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
有关T载体以及蓝白筛选的3个问题
|
||
|
将目的片段与T载体连接，之后转化，蓝白筛选 1.长出白斑，说明T载体之间连上了片段，此片段就应该是目的片段了，因为之前的电泳确定目的片段为单一条带，割胶回收后再跑电泳也是单一条带，但是后续的测序要么是片段大小不对，要么是空载。 2平板在4度放了一段时间拿出来确定菌落是白色，第二天再看还是白色，不可能是传说中的没有变蓝，难道空载的也会是蓝色？那蓝白筛选还有什么作用 3菌落pcr有正确条带，对相应的菌提取质粒，送去测序后结果总是不对，这是为何？感受态转化之后的涂布量应该怎么控制，会不会是我涂布了过多的菌泥导致游离的质粒都附着在了菌落上或者周围，导致的结果就是挑取十个白斑，十个白斑pcr都正确，结果测序都不对，这种可能性应该不大吧 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有109人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带
已经有12人回复
- 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因·
已经有21人回复
- 蓝白斑筛选没有菌落，或者都是白斑，是什么情况
已经有9人回复
- 关于目的基因不同向连接到T载体上的问题
已经有19人回复
- 最近做T克隆都是阴性，怎么回事？
已经有14人回复
- 蓝白斑筛选 菌落成串
已经有15人回复
- T载体连接问题
已经有3人回复
- 构建克隆载体时出现的问题
已经有11人回复
- PMD19-T载体连接不上428bp的片段
已经有20人回复
- Amp、IPTG和X-gal的使用
已经有12人回复
- 菌落PCR筛选
已经有17人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 长片段DNA如何连接载体
已经有21人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- pGEM-T Easy载体的相关问题-讨论
已经有7人回复
- 蓝白斑筛选问题
已经有6人回复
- 蓝白斑筛选出现的问题
已经有11人回复
- 【求助】T载体转化DH5α，平板上没有斑
已经有20人回复
- 【求助/交流】克隆Amp/Kan选择以及蓝白筛选
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于T载体连接问题
已经有22人回复
- 【求助/交流】TA克隆为什么会长出蓝斑
已经有4人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选
已经有6人回复
9楼2014-06-25 00:07:03
yang0071
木虫 (职业作家)
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-10-12 15:31:28
zgb1982
木虫 (正式写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 2895.3
- 红花: 3
- 帖子: 536
- 在线: 227.2小时
- 虫号: 664342
- 注册: 2008-11-29
- 专业: 植物病理学
3楼2013-10-12 21:20:58
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-13 02:42:43
gyesang: 回帖置顶 2013-10-13 02:42:45
s24512453: 金币+5 2013-10-13 08:22:02
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-13 02:42:43
gyesang: 回帖置顶 2013-10-13 02:42:45
s24512453: 金币+5 2013-10-13 08:22:02
|
1. 白斑说明有插入，是不是目的片段就不一定了，所以蓝白斑只是初筛，需要进一步鉴定。 2. 空载体是蓝斑。 3. 菌落PCR会有假阳性的可能。对阳性克隆提质粒做酶切鉴定后再送测序。转化涂布的量一般考经验控制，新手可以多涂几个不同量的板子。菌落PCR一般用的是载体上的引物，如果用片段特异性引物也是一个用片段特异引物，一个用载体上的引物。所以你说的什么游离DNA影响PCR扩增的假设基本不成立。而且你也对阳性克隆提取了质粒，应该先做酶切鉴定，酶切图谱正确后再测序。 |
4楼2013-10-13 01:40:09
