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重组质粒酶切验证没有目的条带
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在构建慢病毒表达载体时，摇完菌提质粒酶切。在进行第二次酶切后，插入的目的条带电泳没有显示。这是为什么呢 本人构建完后提质粒先进行PCR验证过，扩增出了目的条带大小的片段，在第一步酶切时，电泳显示条带大小在10,000bp附近（我的载体为7.8kb, insert 为2250p）。后来分别用两个酶酶切后，大小也对。 我该如何解决第二部酶切的问题。 个人设想的是： 分别酶切+单酶切酶切产物PCR+重组质粒PCR+两步酶切后产物PCR=质粒构建成功。 不知可以不 |
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