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切胶回收DNA失败,没经验,望指点
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1. 吸附柱平衡:向吸附柱CB2中加入500 μL 平衡液BL,12,000 r/min 离心 1 min,弃废液,放回收集管 2. 捣碎胶,加入5倍PB结合液,混匀。60℃水浴10 min ,直到胶溶解为止,期间上下颠倒2~3次。 3. 冷却后,加入到已经平衡好的CB2中,室温2~5 min,12,000 r/min 离心 1 min,弃废液,放回收集管 4. 加入600 μL漂洗液PW (其中含80%乙醇),放置5 min,12,000 r/min 离心 1 min,弃废液,放回收集管 5. 重复上述4操作一次 6. 12,000 r/min 离心 2 min,CB2 开盖2~5 min,并甩空柱去除残留乙醇 7. 将CB2置于干净的收集管,加入洗脱液EB 30 μL,50℃ 水浴 2min,静置2~5 min 8. 12,000 r/min 离心 1 min,管底溶液为DNA 溶液 9. 去5 μL进行0.8 %琼脂糖电泳检测 PCR 后检测有亮带,回收失败,不知还有什么需要注意的,望指点 |
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