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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何从PAGE胶及尿素变性PAGE胶回收DNA样品
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猪猪@@

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何从PAGE胶及尿素变性PAGE胶回收DNA样品

我需要跑PAGE胶和尿素变性PAGE胶，回收DNA样品。请问下哪种胶比较容易回收DNA样品？
其中从PAGE胶回收的DNA要做PCR, 只要回收到模板能做PCR就可以了。
尿素变性PAGE胶需要回收DNA样品，有没有比较好的回收办法？回收效率大概有多少？如果没有，PAGE胶有没有好的回收办法？ 希望各位帮忙，谢谢！
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1楼2011-06-20 17:15:49
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-20 21:02:51
猪猪@@(金币+8): 2011-06-20 23:56:47
如果仅仅用来做PCR的话，可以把你要的条带切下来，尽量把胶条切小，然后直接用作模板，同样的PCR条件不需要更改。这方法没有问题的。
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2楼2011-06-20 18:10:43
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smiled001

禁虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流，欢迎常来 2011-06-20 21:03:08
本帖内容被屏蔽
3楼2011-06-20 18:31:53
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猪猪@@

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gaoyang636 at 2011-06-20 18:10:43:
如果仅仅用来做PCR的话，可以把你要的条带切下来，尽量把胶条切小，然后直接用作模板，同样的PCR条件不需要更改。这方法没有问题的。

直接切胶做PCR会不会模板的量太多呀~还有这个电泳是不是用非变性PAGE胶跑的？谢谢呵~
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4楼2011-06-20 23:56:33
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猪猪@@

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by smiled001 at 2011-06-20 18:31:53:
把条带切下来，加TE，尽量弄碎，下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃，4℃反复冻融三次，每次1h
PCR的时候取1μL作为模板

第3个方法没搞明白，每次-20℃和4℃各多长时间？哪种方法比较好用?谢谢哦~准备要做，问题比较多，望见谅。
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5楼2011-06-21 00:08:27
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joo

金虫 (正式写手)
其实很简单，正如上面两位所说的那样。要勇于尝试！
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6楼2011-06-21 08:18:23
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 猪猪@@ at 2011-06-20 23:56:33:
直接切胶做PCR会不会模板的量太多呀~还有这个电泳是不是用非变性PAGE胶跑的？谢谢呵~

看你想干啥了，如果想要打开高级结构，让DNA变成单链状态，就用变性PAGE（加尿素的）跑（跑前95度处理5min，然后冰上速冷）；
否则就用普通PAGE跑；
记得Marker也要和样品一样的处理，要变性都得变性～

看你条带亮不亮了，自己估计一下就行，不用很精确，觉得多的话，就少用点胶呗，剩下的动起来备用；我做过的条带都不亮，染色后勉强可见，就直接切了用了。
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7楼2011-06-21 12:35:21
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smiled001

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2011-06-22 19:42:05
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