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猪猪@@

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何从PAGE胶及尿素变性PAGE胶回收DNA样品

我需要跑PAGE胶和尿素变性PAGE胶,回收DNA样品。请问下哪种胶比较容易回收DNA样品?
其中从PAGE胶回收的DNA要做PCR, 只要回收到模板能做PCR就可以了。
尿素变性PAGE胶需要回收DNA样品,有没有比较好的回收办法?回收效率大概有多少?如果没有,PAGE胶有没有好的回收办法? 希望各位帮忙,谢谢!
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-20 21:02:51
猪猪@@(金币+8): 2011-06-20 23:56:47
如果仅仅用来做PCR的话,可以把你要的条带切下来,尽量把胶条切小,然后直接用作模板,同样的PCR条件不需要更改。这方法没有问题的。
2楼2011-06-20 18:10:43
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smiled001

禁虫 (小有名气)

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流,欢迎常来 2011-06-20 21:03:08
本帖内容被屏蔽

3楼2011-06-20 18:31:53
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猪猪@@

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by gaoyang636 at 2011-06-20 18:10:43:
如果仅仅用来做PCR的话,可以把你要的条带切下来,尽量把胶条切小,然后直接用作模板,同样的PCR条件不需要更改。这方法没有问题的。

直接切胶做PCR会不会模板的量太多呀~还有这个电泳是不是用非变性PAGE胶跑的?谢谢呵~
4楼2011-06-20 23:56:33
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猪猪@@

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by smiled001 at 2011-06-20 18:31:53:
把条带切下来,加TE,尽量弄碎,下面三种方法选一种做
1.60℃水浴1h
2.4℃过夜
3.-20℃,4℃反复冻融三次,每次1h
PCR的时候取1μL作为模板

第3个方法没搞明白,每次-20℃和4℃各多长时间?哪种方法比较好用?谢谢哦~准备要做,问题比较多,望见谅。
5楼2011-06-21 00:08:27
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joo

金虫 (正式写手)

其实很简单,正如上面两位所说的那样。要勇于尝试!
6楼2011-06-21 08:18:23
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 猪猪@@ at 2011-06-20 23:56:33:
直接切胶做PCR会不会模板的量太多呀~还有这个电泳是不是用非变性PAGE胶跑的?谢谢呵~

看你想干啥了,如果想要打开高级结构,让DNA变成单链状态,就用变性PAGE(加尿素的)跑(跑前95度处理5min,然后冰上速冷);
否则就用普通PAGE跑;
记得Marker也要和样品一样的处理,要变性都得变性~

看你条带亮不亮了,自己估计一下就行,不用很精确,觉得多的话,就少用点胶呗,剩下的动起来备用;我做过的条带都不亮,染色后勉强可见,就直接切了用了。
7楼2011-06-21 12:35:21
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smiled001

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

8楼2011-06-22 19:42:05
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