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美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-10-04 16:09:40
你5ul样品跑胶 加loading buffer了吗?
你用的KIT ,确定 是用60度溶胶?按着Protocol做

方案没有提到用多少度溶胶,我一开始用60度,发现不溶,升到了65度
11楼2013-10-04 20:59:07
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 小齐018 at 2013-10-04 20:56:28
1.第3步之后的滤液重新过柱,重复第3部,以提高片段的吸附率!
2.第6步之后,要等乙醇挥发完之后再进行下一步,方法是用鼻子闻不到味道为止。
3.第8步之后重复一次,提高洗脱率。
希望能帮到你!

多谢!
12楼2013-10-04 21:06:15
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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:07:39
引用回帖:
9楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-10-04 20:55:54
切胶样有0.5g,切胶是在紫外灯在切出大概的位置,在外面操作的,可能切到没有亮带之处,在短波长紫外灯照久了,DNA是诱变还是降解了呢?
上样我是将梳子用透明胶包起来,上样量就加大了很多,只是样品比较容易冲出 ...

当然DNA在紫外下时间越短越好,但是也没那么娇气。在紫外下切也没什么,但是要保护好眼睛更重要。切完后开紫外看看原来的位置还有没有条带。
500bp,如果没有其它条带干扰1%胶就行,3倍没问题,按说明书做。我们也用那盒子,挺好的。
量少的话多做几管,多离心几次,弄一个柱子里。
祝成功!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
13楼2013-10-05 10:24:53
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-10-04 20:59:07
方案没有提到用多少度溶胶,我一开始用60度,发现不溶,升到了65度...

一般溶胶是50-55度,65度是绝对禁止的,因为超过65度DNA会降解。。。
protocol明确写着的
14楼2013-10-05 16:47:36
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

???????:
14?: Originally posted by liyongliangx at 2013-10-05 16:47:36
????????50-55???65???????????????????65??DNA????????
protocol???д???...

胶是用玻璃棒???碎,胶在60度很久都??溶解,晃动也??行

[ ????С??????? ]
15楼2013-10-05 18:19:26
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平凡乌托邦

铁虫 (正式写手)

最可能的原因是PCR产物较少,可以多P几管切!
理想很丰满,现实很骨感
16楼2013-10-05 18:48:46
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

???????:
15?: Originally posted by ???????? at 2013-10-05 18:19:26
胶是用玻璃棒???碎,胶在60度很久都??溶解,晃动也??行
...

??????
17楼2013-10-05 21:00:15
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ljj0720

银虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:07:53
你胶溶解温度太高吧 一般50度就可以了 十分钟  期间每隔2分钟 上下颠倒混匀几次 绝对就溶解了 。还有 你竟然不在紫外线下切胶 ?敢问  您是怎么看到条带的  能保证把条带切完吗    当然DNA在紫外下时间越短越好,但是DNA也没那么娇气。在紫外下快点切没事的,但是要保护好眼睛更重要。切完后开紫外看看原来的位置还有没有条带。

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18楼2013-10-05 21:02:38
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-10-05 16:47:36
一般溶胶是50-55度,65度是绝对禁止的,因为超过65度DNA会降解。。。
protocol明确写着的...

我用55度溶胶,都快一个小时都不溶,胶已用玻璃棒捣的够碎,水浴期间每过2~3min就摇晃一下。我是要鉴定菌株,能否用PCR 扩增后体系代替切胶用试剂盒纯化呢?
19楼2013-10-06 10:30:30
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-10-05 21:02:38
你胶溶解温度太高吧 一般50度就可以了 十分钟  期间每隔2分钟 上下颠倒混匀几次 绝对就溶解了 。还有 你竟然不在紫外线下切胶 ?敢问  您是怎么看到条带的  能保证把条带切完吗    当然DNA在紫外下时间越短越好,但 ...

我用55度溶胶,都快一个小时都不溶,胶已用玻璃棒捣的尽量碎,水浴期间每过2~3min就上下颠倒混匀,不知你是怎样破碎胶的?
20楼2013-10-06 10:41:23
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