24小时热门版块排行榜    

查看: 4075  |  回复: 25

美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-10-04 16:09:40
你5ul样品跑胶 加loading buffer了吗?
你用的KIT ,确定 是用60度溶胶?按着Protocol做

方案没有提到用多少度溶胶,我一开始用60度,发现不溶,升到了65度
11楼2013-10-04 20:59:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 小齐018 at 2013-10-04 20:56:28
1.第3步之后的滤液重新过柱,重复第3部,以提高片段的吸附率!
2.第6步之后,要等乙醇挥发完之后再进行下一步,方法是用鼻子闻不到味道为止。
3.第8步之后重复一次,提高洗脱率。
希望能帮到你!

多谢!
12楼2013-10-04 21:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:07:39
引用回帖:
9楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-10-04 20:55:54
切胶样有0.5g,切胶是在紫外灯在切出大概的位置,在外面操作的,可能切到没有亮带之处,在短波长紫外灯照久了,DNA是诱变还是降解了呢?
上样我是将梳子用透明胶包起来,上样量就加大了很多,只是样品比较容易冲出 ...

当然DNA在紫外下时间越短越好,但是也没那么娇气。在紫外下切也没什么,但是要保护好眼睛更重要。切完后开紫外看看原来的位置还有没有条带。
500bp,如果没有其它条带干扰1%胶就行,3倍没问题,按说明书做。我们也用那盒子,挺好的。
量少的话多做几管,多离心几次,弄一个柱子里。
祝成功!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
13楼2013-10-05 10:24:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-10-04 20:59:07
方案没有提到用多少度溶胶,我一开始用60度,发现不溶,升到了65度...

一般溶胶是50-55度,65度是绝对禁止的,因为超过65度DNA会降解。。。
protocol明确写着的
14楼2013-10-05 16:47:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)

???????:
14?: Originally posted by liyongliangx at 2013-10-05 16:47:36
????????50-55???65???????????????????65??DNA????????
protocol???д???...

胶是用玻璃棒???碎,胶在60度很久都??溶解,晃动也??行

[ ????С??????? ]
15楼2013-10-05 18:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

平凡乌托邦

铁虫 (正式写手)

最可能的原因是PCR产物较少,可以多P几管切!
理想很丰满,现实很骨感
16楼2013-10-05 18:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

???????:
15?: Originally posted by ???????? at 2013-10-05 18:19:26
胶是用玻璃棒???碎,胶在60度很久都??溶解,晃动也??行
...

??????
17楼2013-10-05 21:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-06 02:07:53
你胶溶解温度太高吧 一般50度就可以了 十分钟  期间每隔2分钟 上下颠倒混匀几次 绝对就溶解了 。还有 你竟然不在紫外线下切胶 ?敢问  您是怎么看到条带的  能保证把条带切完吗    当然DNA在紫外下时间越短越好,但是DNA也没那么娇气。在紫外下快点切没事的,但是要保护好眼睛更重要。切完后开紫外看看原来的位置还有没有条带。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

18楼2013-10-05 21:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-10-05 16:47:36
一般溶胶是50-55度,65度是绝对禁止的,因为超过65度DNA会降解。。。
protocol明确写着的...

我用55度溶胶,都快一个小时都不溶,胶已用玻璃棒捣的够碎,水浴期间每过2~3min就摇晃一下。我是要鉴定菌株,能否用PCR 扩增后体系代替切胶用试剂盒纯化呢?
19楼2013-10-06 10:30:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-10-05 21:02:38
你胶溶解温度太高吧 一般50度就可以了 十分钟  期间每隔2分钟 上下颠倒混匀几次 绝对就溶解了 。还有 你竟然不在紫外线下切胶 ?敢问  您是怎么看到条带的  能保证把条带切完吗    当然DNA在紫外下时间越短越好,但 ...

我用55度溶胶,都快一个小时都不溶,胶已用玻璃棒捣的尽量碎,水浴期间每过2~3min就上下颠倒混匀,不知你是怎样破碎胶的?
20楼2013-10-06 10:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 美丽的家园 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +3 且听虎啸 2026-08-07 5/250 2026-08-07 16:50 by wdc28
[基金申请] 关于filecode +3 布布和一二 2026-08-07 4/200 2026-08-07 16:34 by 医学老男孩
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +23 低垂的野花 2026-07-31 31/1550 2026-08-07 12:22 by speculiar
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 基金中了 +11 laoda193707 2026-08-06 11/550 2026-08-07 10:54 by TT和NN
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见