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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » HIS蛋白纯化 溶菌酶
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sunlifang

木虫 (正式写手)

[求助] HIS蛋白纯化 溶菌酶

我在蛋白纯化时加了溶菌酶后最下方总会出现一排杂带，求高手解释，谢谢
HIS蛋白纯化   溶菌酶
蛋白纯化M,-28a-2,-1，1ACL2-28a-2,-1，28a-2,-1.jpg


HIS蛋白纯化   溶菌酶-1
蛋白纯化-不加溶菌酶-28a-3，2,-1，加溶菌酶-28a-4，-3，-2,-1，28a-2,-1，M.jpg
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1楼 2013-09-30 11:36:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunlifang: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-09-30 14:00:10
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-30 17:12:36
应该是溶菌酶的带，溶菌酶的理论分子量是14.3kD。
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2楼2013-09-30 13:36:23
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sunlifang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-30 13:36:23
应该是溶菌酶的带，溶菌酶的理论分子量是14.3kD。

那我想再请问此带可以去除吗？用什么方法，谢谢
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3楼2013-09-30 14:00:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by sunlifang at 2013-09-30 14:00:47
那我想再请问此带可以去除吗？用什么方法，谢谢...

我觉得你纯化时可能是柱子洗得不充分，杂带多。理论上经镍柱纯化后应该可以除掉。
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4楼2013-10-01 00:16:03
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feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunlifang: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-01 19:55:41
纯化操作有问题，溶菌酶没除掉。
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5楼2013-10-01 00:42:15
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sunlifang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-01 00:16:03
我觉得你纯化时可能是柱子洗得不充分，杂带多。理论上经镍柱纯化后应该可以除掉。...

我用的洗脱buffer是20mM咪唑，我正考虑加大咪唑浓度，这种是不是浓度太大了也不好？非常感谢你的回答。
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6楼2013-10-01 19:57:16
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sunlifang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-01 00:16:03
我觉得你纯化时可能是柱子洗得不充分，杂带多。理论上经镍柱纯化后应该可以除掉。...

再补充下，我用的binding buffer是20mM咪唑，wash buffer是20mM咪唑，elution buffer是500mM咪唑
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7楼2013-10-01 20:42:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sunlifang at 2013-10-01 20:42:50
再补充下，我用的binding buffer是20mM咪唑，wash buffer是20mM咪唑，elution buffer是500mM咪唑...

我觉得是洗得时间不够，增加洗涤时间和体积。
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sunlifang
8楼2013-10-02 01:56:29
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wuyao0513

新虫 (小有名气)
好多的杂带啊！！！镍柱不行啊
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sunlifang
9楼2013-10-02 11:23:18
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sunlifang

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-10-02 11:23:18
好多的杂带啊！！！镍柱不行啊

柱子还是挺新的呵呵
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10楼2013-10-02 19:28:27
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