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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问大家过柱子用缓冲液去除杂蛋白一般多长时间? 已有4人参与

我纯化溶菌酶,上样后用碳酸氢钠平衡去除杂蛋白,看文献说281紫外分光光度下<0.1就可以,但是我平衡了4、5个小时,值还是0.3几。有时候还更高些,怎么回事。新人,木有金币。。谢谢各位大虾了
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2013-02-01 19:00:32
本帖内容被屏蔽

2楼2013-02-01 15:52:23
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happychick

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在上样之前你平衡柱子了么?
永远走自己的路,坚持下去
3楼2013-02-02 11:23:16
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frankstone

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可考虑 1、基线是否平衡或者检测器是否归零? 2.不应该用时间衡量,毕竟流速、柱子条件都不一样,主要根据洗脱液的检测,稳定后用柱体积,3、为何用碳酸氢钠平衡去除杂蛋白,一般离子交换柱用低浓度的NaCl。问题描述的不是太清楚。
做最好的自己。
4楼2013-02-02 14:17:14
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by danbomingyue at 2013-02-01 15:52:23
首先你要考虑一下,是不是你的紫外检测器没有在平衡之后进行归零。

我都是自己手动测的。。。没有紫外检测器,╮(╯▽╰)╭
5楼2013-02-02 14:25:23
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by happychick at 2013-02-02 11:23:16
在上样之前你平衡柱子了么?

平衡了啊,也是碳酸氢钠,测得紫外0.007
6楼2013-02-02 14:25:48
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by frankstone at 2013-02-02 14:17:14
可考虑 1、基线是否平衡或者检测器是否归零? 2.不应该用时间衡量,毕竟流速、柱子条件都不一样,主要根据洗脱液的检测,稳定后用柱体积,3、为何用碳酸氢钠平衡去除杂蛋白,一般离子交换柱用低浓度的NaCl。问题描述 ...

1。我是手动测得,肯定归零了。2 这个我得凝胶时自己做的,很有关系,可能胶不好,因为上样过程它还往下沉了。3我是在验证师姐的实验,她用的碳酸氢钠,是亲和法。谢谢啦
7楼2013-02-02 14:27:54
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lihuan0525

金虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主是不是在做层析啊,不知道楼主用的柱子是新的还是用过的, 还有如果是用过的,上次用完后再生有没有再生好,请楼主先把这些弄清楚
8楼2013-02-04 11:36:24
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-02-04 11:36:24
楼主是不是在做层析啊,不知道楼主用的柱子是新的还是用过的, 还有如果是用过的,上次用完后再生有没有再生好,请楼主先把这些弄清楚

是层析,柱子里的胶是没有用过的,但是在冰箱放了大半年了,是不是也有影响
9楼2013-02-04 16:33:08
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