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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请问大家过柱子用缓冲液去除杂蛋白一般多长时间？
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问大家过柱子用缓冲液去除杂蛋白一般多长时间？ 已有4人参与

我纯化溶菌酶，上样后用碳酸氢钠平衡去除杂蛋白，看文献说281紫外分光光度下＜0.1就可以，但是我平衡了4、5个小时，值还是0.3几。有时候还更高些，怎么回事。新人，木有金币。。谢谢各位大虾了
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1楼 2013-01-31 21:54:57
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2013-02-01 19:00:32
本帖内容被屏蔽
2楼2013-02-01 15:52:23
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happychick

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在上样之前你平衡柱子了么?
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永远走自己的路，坚持下去
3楼2013-02-02 11:23:16
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frankstone

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可考虑 1、基线是否平衡或者检测器是否归零？ 2.不应该用时间衡量，毕竟流速、柱子条件都不一样，主要根据洗脱液的检测，稳定后用柱体积，3、为何用碳酸氢钠平衡去除杂蛋白，一般离子交换柱用低浓度的NaCl。问题描述的不是太清楚。
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做最好的自己。
4楼2013-02-02 14:17:14
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by danbomingyue at 2013-02-01 15:52:23
首先你要考虑一下，是不是你的紫外检测器没有在平衡之后进行归零。

我都是自己手动测的。。。没有紫外检测器，╮(╯▽╰)╭
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5楼2013-02-02 14:25:23
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by happychick at 2013-02-02 11:23:16
在上样之前你平衡柱子了么?

平衡了啊，也是碳酸氢钠，测得紫外0.007
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6楼2013-02-02 14:25:48
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by frankstone at 2013-02-02 14:17:14
可考虑 1、基线是否平衡或者检测器是否归零？ 2.不应该用时间衡量，毕竟流速、柱子条件都不一样，主要根据洗脱液的检测，稳定后用柱体积，3、为何用碳酸氢钠平衡去除杂蛋白，一般离子交换柱用低浓度的NaCl。问题描述 ...

1。我是手动测得，肯定归零了。2 这个我得凝胶时自己做的，很有关系，可能胶不好，因为上样过程它还往下沉了。3我是在验证师姐的实验，她用的碳酸氢钠，是亲和法。谢谢啦
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7楼2013-02-02 14:27:54
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主是不是在做层析啊，不知道楼主用的柱子是新的还是用过的， 还有如果是用过的，上次用完后再生有没有再生好，请楼主先把这些弄清楚
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8楼2013-02-04 11:36:24
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meibiyaoa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-02-04 11:36:24
楼主是不是在做层析啊，不知道楼主用的柱子是新的还是用过的， 还有如果是用过的，上次用完后再生有没有再生好，请楼主先把这些弄清楚

是层析，柱子里的胶是没有用过的，但是在冰箱放了大半年了，是不是也有影响
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9楼2013-02-04 16:33:08
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