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兰羊羊

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助RNA提取后 PCR为啥跑不出来

提取RNA 很好 小胶检测条带很清楚,为啥跑RT-PCR 用的引物是随机引物Radom. rapad-PCR用的随机锚定配对的,,为啥检测不出来条带啊,求大神指点啊
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LRY111

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 兰羊羊 at 2013-09-22 08:29:14
我们实验室一般都是用的TRIZOL 提取法,老板现在在国外用的也是这种方法,他说可能是反转录试剂盒不行,建议换呢,之前我们用这种方法做的还不错,最近不知道咋回事,艾 做RNA的伤不起啊...

老板并不是什么都懂,我之前用的是Invivogen TRIZOL,但是出了问题,对于RNA提取我研究了半年,才终于搞清楚。如果你能够用TRIZOL提取出RNA,那么建议在沉淀时减少加入异丙醇的量,希望能够对你有所帮助。
8楼2013-09-22 18:34:04
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
兰羊羊: 金币+1, 有帮助, 如果用β-actin作为内参,你的反应体系和程序是什么呀? 2013-09-14 22:18:16
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。从根本去入手 2013-09-15 13:43:32
做一个看家基因试试, 要是还没有产物的话考虑是不是反转录做失败了
2楼2013-09-14 21:50:32
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LRY111

新虫 (初入文坛)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-20 00:55:10
应该是你的RNA纯度较低,含有多酚类杂质以至于反转录酶失活了,建议测定一下260/230是否大于2.0
3楼2013-09-19 19:48:43
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兰羊羊

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by LRY111 at 2013-09-19 19:48:43
应该是你的RNA纯度较低,含有多酚类杂质以至于反转录酶失活了,建议测定一下260/230是否大于2.0

不大于2,测的才是1点几
4楼2013-09-21 08:47:19
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