应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助RNA提取后 PCR为啥跑不出来
111/2返回列表12下一页
查看: 2630  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

兰羊羊

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助RNA提取后 PCR为啥跑不出来

提取RNA 很好 小胶检测条带很清楚，为啥跑RT-PCR 用的引物是随机引物Radom. rapad-PCR用的随机锚定配对的，，为啥检测不出来条带啊，求大神指点啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-14 21:44:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

LRY111

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-20 00:55:10
应该是你的RNA纯度较低，含有多酚类杂质以至于反转录酶失活了，建议测定一下260/230是否大于2.0
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-09-19 19:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LRY111

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 兰羊羊 at 2013-09-22 08:29:14
我们实验室一般都是用的TRIZOL 提取法，老板现在在国外用的也是这种方法，他说可能是反转录试剂盒不行，建议换呢，之前我们用这种方法做的还不错，最近不知道咋回事，艾 做RNA的伤不起啊...

老板并不是什么都懂，我之前用的是Invivogen TRIZOL，但是出了问题，对于RNA提取我研究了半年，才终于搞清楚。如果你能够用TRIZOL提取出RNA，那么建议在沉淀时减少加入异丙醇的量，希望能够对你有所帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-09-22 18:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
兰羊羊: 金币+1, ★有帮助, 如果用β-actin作为内参，你的反应体系和程序是什么呀？ 2013-09-14 22:18:16
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。从根本去入手 2013-09-15 13:43:32
做一个看家基因试试, 要是还没有产物的话考虑是不是反转录做失败了
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-14 21:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兰羊羊

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by LRY111 at 2013-09-19 19:48:43
应该是你的RNA纯度较低，含有多酚类杂质以至于反转录酶失活了，建议测定一下260/230是否大于2.0

不大于2，测的才是1点几
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-21 08:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xv1215

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
兰羊羊: 金币+2, ★有帮助, 好的，谢谢哈 2013-09-22 08:24:51
先测一下260/280在1.8-2.0之间可用，上下浮动不大也可，然后就是内参基因一起来，再不出来就得检查PCR的参数了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-21 10:36:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LRY111

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 兰羊羊 at 2013-09-21 08:47:19
不大于2，测的才是1点几...

你的RNA中存在较高含量的多酚类物质，致使你的反转录酶失活，这是你进行PCR失败的主要原因。
建议方法：使用CTAB-LiCl法提取RNA，此种方法国外已经发了很多文章，你可以查一下。目前，植物RNA的提取要难于动物，原因在于植物细胞中有着过多的植物多酚，如苹果、棉花。你可以查一下相关资料。另外，你现在所提取的RNA如果真如前面我所讲的情况，基本已无法补救，多酚与糖、蛋白质、核酸紧密络合，是无法分开的。RNA在水中的溶解度为40微克/微升，具备较高的溶解能力。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

兰羊羊
6楼2013-09-21 10:42:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兰羊羊

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by LRY111 at 2013-09-21 10:42:39
你的RNA中存在较高含量的多酚类物质，致使你的反转录酶失活，这是你进行PCR失败的主要原因。
建议方法：使用CTAB-LiCl法提取RNA，此种方法国外已经发了很多文章，你可以查一下。目前，植物RNA的提取要难于动物，原 ...

我们实验室一般都是用的TRIZOL 提取法，老板现在在国外用的也是这种方法，他说可能是反转录试剂盒不行，建议换呢，之前我们用这种方法做的还不错，最近不知道咋回事，艾 做RNA的伤不起啊
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-22 08:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兰羊羊

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by LRY111 at 2013-09-22 18:34:04
老板并不是什么都懂，我之前用的是Invivogen TRIZOL，但是出了问题，对于RNA提取我研究了半年，才终于搞清楚。如果你能够用TRIZOL提取出RNA，那么建议在沉淀时减少加入异丙醇的量，希望能够对你有所帮助。...

非常感谢，你们用的那个反转录试剂盒是什么牌子的？
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-22 20:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兰羊羊

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by LRY111 at 2013-09-22 18:34:04
老板并不是什么都懂，我之前用的是Invivogen TRIZOL，但是出了问题，对于RNA提取我研究了半年，才终于搞清楚。如果你能够用TRIZOL提取出RNA，那么建议在沉淀时减少加入异丙醇的量，希望能够对你有所帮助。...

还有就是我们做的是动物组织的
赞一下 回复此楼
10楼2013-09-22 20:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 兰羊羊 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +4 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 4/200 2026-05-15 22:17 by waitnick
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 4/200 2026-05-15 17:43 by x0mp7owy2b
[论文投稿] 有带发论文的吗 +4 山楂之术 2026-05-09 4/200 2026-05-15 15:40 by 妹子不好惹
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[基金申请] 青C资助名额大幅增加！ +11 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 15/750 2026-05-15 14:36 by ambravo
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 3/150 2026-05-15 12:03 by onwj4wpxp2
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗 +9 dd921ww 2026-05-12 10/500 2026-05-15 10:41 by muyiliuhui
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 3/150 2026-05-15 09:23 by onwj4wpxp2
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cjf4bx70cj 2026-05-14 4/200 2026-05-15 09:03 by gagyerk94e
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[基金申请] 重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50% +5 水和泥不是水泥 2026-05-13 7/350 2026-05-14 20:57 by 水和泥不是水泥
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 5/250 2026-05-14 20:15 by 一切都是空工
[高分子] 本人最近太闲了，谁有问题可以提，每天会统一回复 +8 一切都是空工 2026-05-12 19/950 2026-05-14 20:03 by 一切都是空工
[考博] 申博自荐 +4 食品的橙子 2026-05-09 6/300 2026-05-14 16:05 by great1919
[基金申请] 请问大佬b0816评完了吗 +3 市民华南虎 2026-05-12 7/350 2026-05-14 07:41 by 市民华南虎
[硕博家园] 导师各种操作恶心咋办 +11 苍白的小青天 2026-05-09 13/650 2026-05-13 17:11 by 六两废铜
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
[考博] 西南大学考核制博士 +3 lijunjie84 2026-05-11 6/300 2026-05-12 18:09 by lijunjie84
[文学芳草园] 窗边初夏的小雨 +7 阿美_Lml888 2026-05-09 10/500 2026-05-12 15:27 by 阿美_Lml888
[考博] 现在不知道怎么办，感觉很痛苦 +4 qweww 2026-05-11 5/250 2026-05-11 20:23 by Oversize
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭