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atous

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 108
帖子: 8
在线: 4.2小时
虫号: 1621673
注册: 2012-02-16
性别: GG
专业: 肾上腺发育及结构异常

[交流] 溶解曲线，重复性不好已有2人参与

相对定量PCR中，我将同一样本同一指标重复3次，可得到的溶解曲线并不一致，且多数有双峰，求指导

ALDHA3,P4-2.jpg

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ALDHA3,7404H2.jpg

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1楼 2013-08-25 11:39:22

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necilyx

金虫 (正式写手)

应助: 55 (初中生)
金币: 914.6
散金: 106
红花: 5
帖子: 383
在线: 201小时
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 18:35:42

这应该明显的非特异性扩增，重新做一次模版，试试提高些退火温度或者增加Mg离子浓度，还不行就只能重新设计引物了。。

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聪明才智要为意外做准备~~

3楼2013-08-26 16:28:49

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-08-25 16:31:16

引物特异性问题或者是RNA样品中有gDNA。

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2楼2013-08-25 12:51:55

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atous

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