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kamiles_007

新虫 (初入文坛)


[交流] 最近实验室T载体连接一直都假阳性

最近一个月来,实验室几个同学包括我在内,所有做分子的都是T载体连接总是得不到自己想要的阳性克隆,菌液PCR的电泳图显示,连接上的片段总是比我的目的片段要短,不知道是什么原因!
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-30 22:26:22
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9楼2013-09-09 15:19:47
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)



kamiles_007(金币+1): 谢谢参与
连接前胶回收过吗?确保是纯的DNA?
2楼2013-08-22 08:51:55
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charrymiao

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★
kamiles_007(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-22 17:15:11
首先,你先测一下你核酸胶回收的浓度,看浓度怎么样,说不定胶回收操作有问题。然后,看看你的连接条件是不是有什么问题。电泳跑的短我也发生过,但是最后测序没什么问题,最后大家说那染料有问题。你下次多跑会儿,把胶的浓度稍微降低看看。希望能帮到你!
3楼2013-08-22 11:26:50
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Da果冻

铜虫 (初入文坛)


★ ★ ★
kamiles_007(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-30 22:25:36
我们实验室以前也是碰到这样的问题,连接之前目的片段需要切胶回收,你得保证胶回收试剂盒的质量,有较高的浓度连接T载体阳性克隆才会多,而且摩尔比例要控制在目的片段:T载体=1:4左右,你再试试吧
5楼2013-08-23 01:37:23
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